中华人民共和国国家标准
GB/T23218-2008
Determination of zeranol residues in animal original foodLC-MS-MSmethod
中国国家标准化管理委员会 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局 发布
前言
本标准的附录A、附录B为资料性附录.
本标准由中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局提出并归口.
本标准起草单位：中华人民共和国秦皇岛出人境检验检疫局、中华人民共和国上海出人境检验检疫局.
本标准主要起草人：方晓明、盛永刚、王敏、王传现、庞国芳.
动物源性食品中玉米赤霉醇残留量的测定 液相色谱-串联质谱法
1范围
本标准规定了动物源性食品中玉米赤霉醇（zeranol）、β-玉米赤霉醇（g-zearalanol）和玉米赤霉烷酮（zearalanone）残留量的高效液相色谱-中联质谱的测定方法.
本标准适用于动物肌肉、肝脏、鱼肉、蛋和牛奶中玉米赤霉醇、3-玉米赤霉醇和玉米赤霉烷酮残留量的测定.
本标准方法检出限为1ug/kg.
2规范性引用文件
下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款.凡是注日期的引用文件，其随后的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然面，鼓励根据本标准达成协议的各方研究 是否可使用这些文件的最新版本.凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准.
GB/T6379.1测量方法与结果的准确度（正确度与精密度）第1部分：总则与定义(GB/T 6379. 1-2004 ISO 5725-1:1994 IDT)
性与再现性的基本方法（GB/T6379.2-2004 ISO5725-2；1994，IDT） GB/T6379.2测量方法与结果的准确度（正确度与精密度）第2部分：确定标准测量方法重复
GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法（GB/T6682-2008，1SO3696：1987 MOD)
3原理
化后，用液相色谱-申联质谱仪测定，外标法定量. 样品经3-葡萄糖苷酸-硫酸酯复合酶水解后，用乙醚提取，提取液经液液分配、HLB固相萃取柱净
4试剂和材料
除另有规定外，所用试剂均为分析纯，试验用水应符合GB/T6682一级水的标准.
4.1甲醇：色谱纯.4.2乙睛：色谱纯.4.3无水乙醚.4.4三氯甲烷.4.5氢氧化钠，4.6乙酸钠（NaAc 3HO). 4.7磷酸：纯度大于85%.4.8冰乙酸.4.90.5mol/L氢氧化钠溶液：称取20g氢氧化钠，用水溶解并定容至1L定容至1L 4.11磷酸溶液（14）:10mL磷酸和40mL水混合.4.12甲醇-水溶液（11)：50mL甲醇和50mL水混合.
GB/T 23218-2008
4.13β-葡萄糖苷酸酶-硫酸酯复合酵：96000 U/mLβ-葡萄糖苷酸酶；390 U/mL 硫酸酯酶（H-2 formhelix pomatia) .4.14玉米赤霉醇、3-玉米赤霉醇和玉米赤霉烷酮标准物质：纯度≥99%. 4.15100μg/mL标准储备溶液：分别准确称取适量标准品（精确至0.1mg），用乙晴溶解，配制成浓度为100μg/mL的标准储备溶液.一18C以下冷冻避光保存.4.1610μg/mL和1.0pg/mL的混合标准中间溶液：分别准确吸取1.0mL和0.10mL标准储备溶液（4.15）于10mL容量瓶中，用乙腊定容至刻度，配制成浓度为10μg/mL和1.0μg/mL混合标准中4.17基质混合标准工作溶液：根据需要，取适量的混合标准中间溶液（4.16），用空白样品提取液配成 间溶液.0C～4C冷藏避光保存.不同浓度的基质混合标准溶液，基质混合标准工作溶液现用现配.4.19混膜；0. 20 pm. 4.18OasisHLB固相萃取柱”或相当者：500mg/6mL.使用前分别用5mL甲醇和5mL水预淋洗.
5仪器和设备
5.1液相色谱-中联质谱仪：配有电喷雾离子源（ES1）.5.3分析天平：感量0.1mg和0.01g. 5.2组织捣碎机.5. 4移液器:10 yL~100μrL、100μL~1 000μL5.5均质器：10000r/min.5.6涡旋混合器.5.7恒温振荡器. 5.8离心机：4000 r/min.5.9pH计：测量精度士0.02pH单位.5.10氮吹仪.5.11固相萃取装置. 5.12具塞离心管：50mL.5.13刻度试管：10ml.
6试样的制备与保存
6.2试样保存试样置于一18C冰箱，避光保存.
7测定步骤
7.1样品处理
7.1.1水解
0.025mL3-葡萄糖苷酸-硫酸酯复合酶（4.13），旋涡混匀，于37C水浴中振荡12h. 称取5g试样（精确至0.01g）于50mL具塞离心管中，加人10mL乙酸钠缓冲溶液（4.10）和
7.1.2提取
水解后加入15mL无水乙醚，振荡提取5min后，以4000r/min离心2min，将上清液转移至浓缩
1)OasisHILB国相萃取柱是Waters公司产品的商品名称给出这一信息是为了方便本标准的使用者，并不是表示对该产品的认可，如果其他等效产品具有相同的效果，则可使用这些等效产品.
瓶中，再用15mL无水乙醚重复提取一次，合并上清液，40C以下旋转浓缩至近干.残留物加1.0mL三氯甲烷溶解后，转人10mL离心管中，再用3ml氢氧化钠溶液（4.9）润洗浓缩瓶后转移至同一离心管中，旋涡混匀.以4000r/min离心2min，吸取上层氢氧化钠溶液.再用3mL氢氧化钠溶液（4.9）重 复润洗、萃取一次，合并氢氧化钠溶液，加人1mL磷酸溶液（4.11），混匀后待净化.
7.1.3净化
将样品提取液（7.1.2）转入HLB固相萃取柱（4.18）.用5mL水、5mL甲醇-水溶液（4.12）淋洗，弃去：再用10mL甲醇进行洗脱，收集洗脱液.整个固相萃取净化过程控制流速不超过2mL/min.洗 脱液在40C以下用氮气吹干.残留物用1.0mL乙晴溶解，旋误混匀后，过0.2μm滤膜，供仪器测定用.
7.2测定条件
7.2.1液相色谱参考条件
a）色谱柱：Cs2μm，50mm×2.0mm（内径）或相当者；b）柱温：40C；c) 流速：0.2mL/min;d）进样量：5μL；e）流动相及梯度洗脱条件见表1.
表1流动相及梯度洗脱条件
时间/min 乙晴/% 水/%0 25 755 70 306 70 309 25 75
7.2.2质谱参考条件
a) 电离方式：电喷雾电离（ESI）： 离子源喷雾电压（IS）：3500V；c) 离子源温度（TEM）：350C；(P 喷雾气流量：11L/min；扫描方式：负离子扫描； 检测方式：多反应监测（MRM），监测条件见表2.
表2多反应监测条件
化合物中文名称 化合物英文名称 母离子（m/x） 子离子（m/x1 去额电压/V 碰撞能量/V-玉米赤霉酯 277.2 160 17β-zcaralanol 321 1 303.2 160 17玉米赤霉醇 zearalanol 321 1 277.2 170 16303.2 170 16玉米赤霉烷酮 zearalanone 319 1 275 1 170 16301. 1 170 16离子用于定量.
7.2.3液相色谱-串联质谱测定
7.2.3.1定性测定
每种被测组分选择一个母离子，两个以上子离子，在相同实验条件下，样品中待测物质的保留时间
