中华人民共和国国家标准
GB/T23873-2009
Determination of maduramicin ammonium in feeds
中国国家标准化管理委员会 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局 发布
前言
本标准的附录A为资料性附录.本标准由全国饲料工业标准化技术委员会（SAC/TC76）提出并归口. 本标准起草单位：农业部饲料质量监督检验测试中心（济南）.本标准主要起草人：梁萌、汤文利、任爱丽、赵金毅、黄莹、李永山、刘学江.
饲料中马杜霉素铵的测定
1范围
本标准规定了测定饲料中马杜霉素铵含量的高效液相色谱法（HPLC）和液相色谱-质谱法(LC-MS).
本标准适用于配合饲料、浓缩饲料和添加剂预混合饲料.HPLC法为定量测定方法，定量限为1 mg/kg.LC-MS法为定性测定方法，最低检测含量为0.5mg/kg.
2规范性引用文件
的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然面，鼓励根据本标准达成协议的各方研究 下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款.凡是注日期的引用文件，其随后是否可使用这些文件的最新版本.凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准.
GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法GB/T14699.1饲料采样 GB/T20195动物饲料试样的制备
3采样
3.1采样步骤：按GB/T14699.1的规定执行.3.2试样的制备：按GB/T20195的规定执行.
4HPLC法
4.1原理
用乙晴提取饲料中的马杜霉素铵，蒸干提取液用乙晴溶解，用对-二甲氨基苯甲醛溶液进行柱后衍生，HPLC测定.
4.2试剂和材料
除非另有规定，仅使用分析纯试剂.4.2.1水.GB/T6682，一级.4.2.2甲醇：色谱纯 4.2.3乙晴：色谱纯.4.2.4四氢映响：色谱纯.4.2.5磷酸二氢钾：优级纯.4.2.6磷酸：优级纯.4.2.7对-二甲氨基苯甲醛：纯度99%. 4.2.8硫酸：优级纯.4.2.9磷酸-磷酸二氢钾缓冲溶液（pH3.0）：准确称取2.04g磷酸二氢钾（4.2.5）.加900mL水溶解，加磷酸（4.2.6）数滴调节pH至3.0，转移到1000mL容量瓶中，用水定容、摇匀.4.2.11对-二甲氨基苯甲醛衍生化溶液：准确称取16g对-二甲氨基苯甲醛（4.2.7）于1000mL棕色试剂瓶中.加入400mL甲醇（4.2.2），在磁力搅拌器上搅拌至完全溶解后，逐滴加人8mL硫酸（4.2.8），继续搅拌至溶液均匀，冷却至室温，24h内使用.
4.2.12马杜霉素铵贮备溶液（1000μg/mL）：准确称取107.0mg（精确到0.1mg）马杜霉素铵化学对备溶液.置于4C~8C冰箱中，有效期为1个月.50mL容量瓶中.用乙晴定容.置于4C~8C冰箱中，有效期为1周.4.2.14马杜霉素铵中间溶液Ⅱ（10.0μg/mL）：准确移取马杜霉素铵中间溶液I（4.2.13）5.00mL于50mL容量瓶中，用乙晴定容.置于4C~8C冰箱中，有效期为1周.5.00 μg/mL 10.0 μg/mL50.0 μg/mL 10μg/mL 200μg/mL、300μg/mL 的工作溶液.现用现配.4.3仪器4.3.2分析天平：感量0.1mg. 4.3.1实验室用样品粉碎机，4.3.3碘量瓶：150ml.4.3.4超声波清洗器.4.3.6带盖塑料离心管：100ml. 4.3.5往复式振荡器.4.3.7离心机4.3.8旋转蒸发仪：配置150mL鸡心瓶.4.3.9旋涡混合器.4.3.10高效液相色谱仪：具紫外检测器或二极管阵列检测器. 4.3.11柱后衍生系统.
照品（纯度≥93.7%）于100mL容量瓶中，用乙（4.2.3）溶解、定容，配制成浓度为1000μg/mL的贮
4.2.15马杜霉素铵工作溶液：准确移取马杜霉素铵中间溶液Ⅱ（4.2.14）1.00mL、5.00mL于10mL 容量瓶中.马社霉素铵中间溶液I1.00mL、5.00mL于10mL容量瓶中，马杜霉素铵贮备溶液1.00mL、2.00mL、3.00mL于10mL容量瓶中，用乙稀释、定容，配制成浓度分别为1.00pg/ml、
4.4分析步骤
4.4.1提取
称取约5g试样（精确到0.1mg）于碘量瓶（4.3.3）中，加人乙睛50mL，置于超声波清洗器（4.3.4）中超声15min，然后置于往复式振荡器（4.3.5）中快速振荡提取20min.转移到离心管（4.3.6）中.用 适量乙晴清洗碘量瓶三次，清洗液合并到离心管中_置离心机（4.3.7）4360g离心3min：上清液转移到鸡心瓶（4.3.8）中，在旋转蒸发仪上60C浓缩定容至5.00mL，旋误（4.3.9）混匀，分取适量提取液过有机滤膜上机测定.根据试料溶液中马社霉素铵的浓度用乙睛进行稀释，使其上机浓度不高于300 μg/mL
4.4.2测定
色谱柱：C柱，柱长150mm，内径2.1mm，粒度5pm或类似的分析柱.柱温：25C.检测波长：585nm. 进样量：25zL.流动相：磷酸-磷酸二氢钾缓冲溶液（pH3.0）四氢映嘀甲醇=10040860（4.2.10）.流速：0.4mL/min.
4.4.2.2柱后衍生系统测定参数的设定
衍生化溶液：对-二甲氨基苯甲醛衍生化溶液（4.2.11）.衍生化溶液流速：0.5ml/min.反应器容积：1.00mL.
反应器温度：90C
4.4.2.3定量测定
溶液做单点校准或多点校准，以色谱峰的峰面积进行定量计算. 在上述仪器条件下，分别注人马杜霉素铵工作溶液（4.2.15）和试料溶液（4.4.1）进行测定，用工作
4.5结果计算
饲料中马杜霉素铵的含量X以质量分数表示，单位为毫克每千克（mg/kg），按式（1）计算：
式中：
A-试料溶液中马杜霉素铵峰面积的响应值对应的浓度，单位为微克每毫升（μg/mL)；
V试料溶液的体积，单位为毫升（mL）；
m--试料的质量，单位为克（g）.
每个试样取两份试料进行平行测定，以两次平行测定结果的算术平均值为测定结果，保留三位有效数字，
4.6重复性
在重复性条件下完成的两个平行测定结果的相对偏差不大于10%.
5LC-MS法
5.1原理
用乙睛提取饲料中的马杜霉素铵，提取液蒸干后用乙腊溶解，用LC-MS测定.
5.2试剂和材料
除非另有规定，仅使用分析纯试剂.5.2.1水，GB/T6682，-级.5.2.2乙晴：色谱纯.5.2.3流动相：乙睛（5.2.2）水（5.2.1）=9010_超声脱气5min5.2.4其他同4.2.12~4.2.15.
5.3仪器
5.3.1液相色谱-质谱仪.5.3.2其他同4.3.1~4.3.9.
5.4分析步骤
5.4.1提取
同4.4.1，但需要根据试料溶液中马杜霉素铵的含量用乙晴进行稀释，使上机溶液浓度不高于50 μg/mL-
5.4.2测定
5.4.2.1液相色谱测定参数的设定
色谱柱：C柱，柱长150mm.内径2.1mm.粒度5m或类似的分析柱. 进样量：5pL.流速：0.2mL/min桂温：30C.流动相：乙晴水=9010（5.2.3）.
5.4.2.2质谱测定参数的设定
离子化模式：电喷雾离子源，负离子模式（ESI-）.雾化气压力：2.76×10°Pa（40.0psi）.干燥气流速：9.0L/min.干燥气温度：350C.毛细管出口电压：-3500V.碰撞气：氮气.离子电荷控制
