中华人民共和国国家标准
GB/T24800.4-2009
Determination of chlortalidone and phenothiazine in cosmetics byhigh performance liquid chromatography method
中国国家标准化管理委员会 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局 发布
前言
本标准的附录A为资料性附录.本标准由中国轻工业联合会提出. 本标准由全国香料香精化妆品标准化技术委员会（SAC/TC257）归口，本标准起草单位：中国检验检疫科学研究院、上海市日用化学工业研究所、上海香料研究所.本标准主要起草人：肖海清、张庆、王超、武婷、席广成、王星、吴颖、康薇.
引言
添加到化妆品中.如果技术上无法避免禁用物质作为杂质带人化妆品时，则化妆品成品应符合《化妆品 本标准中的被测物质是我国《化妆品卫生规范》规定的禁用物质，不得作为化妆品生产原料即组分卫生规范》对化妆品的一般要求，即在正常及合理的可预见的使用条件下，不得对人体健康产生危害.
目前我国尚未规定这些物质的限量值，本标准的制定，仅对化妆品中测定这些物质提供检测方法.
化妆品中氯噻酮和吩噻嗪的测定 高效液相色谱法
1范围
本标准规定了化妆品中氯噻酮和盼噻嗪的高效液相测定方法.本标准适用于化妆品中氯噻酮和盼噻嗪含量的测定.本标准对于氯噻酮和吩嗪的检出限为2mg/kg，定量限为8mg/kg.
2原理
以丙酮为提取溶剂，超声波水浴提取后，离心，用0.45μm的有机滤膜过滤，取20uL溶液注入配有紫外检测器的高效液相色谱仪检测，外标法定量.
3试剂和材料
除非另有说明，所用试剂均为分析纯，水为高纯水.
3.1丙酮.3.2无水磷酸二氢钠.3.4甲醇（色谱纯）. 3.3氢氧化钠3.5氯酮，纯度不小于98.0%.3.6吩嗪，纯度不小于99.0%.3.70.5%氢氧化钠溶液：称取2.5g氢氧化钠（3.3），精确至0.001g，用500ml水溶解，保存于塑料瓶中. 3.830mmol/L磷酸二氢钠溶液：称取3.60g无水磷酸二氢钠（3.2）.精确至0.001g，加人1000mL水溶解后，用0.5%氢氧化钠溶液（3.7）调节pH为5.60，过0.45μm有机滤膜.3.9分别称取氯噻酮（3.5）和噻嗪（3.6）0.1g-精确至0.0001g，用甲醇（3.4）溶解后分别定容至100mL容量瓶中.密封、避光、冷藏保存，保存期6个月.3.10氯曝酮和吩噻嗪混合标准储备液（200mg/L）：分别移取氯曝酮和盼噻嗪标准储备液（3.9）10mL 于50mL容量瓶中，用甲醇（3.4）定容，密封、避光、冷藏保存，保存期6个月.3.11标准工作溶液：取一定量混和标准储备液（3.10)，用甲醇（3.4）和30mmol/L磷酸二氢钠溶液（3.8）（5545，v/v）稀释，配制成浓度为0.2mg/L，0.5mg/L，2mg/L，5mg/L 20mg/L的溶液，现用现配.
4仪器
4.1高效液相色谱仪，配紫外检测器.4.2微量进样器，50g.4.3超声波清洗器. 4.4离心机，最高转速不小于15000r/min.4.5溶剂过滤器，能放置孔径为0.45gm的有机过滤膜.4.6具塞比色管10mL25mL.
5试验步骤
5.1提取
称取化妆品试样0.5g（精确到0.001g），置于10mL具塞离心管中，加入丙酮（3.1）6mL，充分混匀，在超声波清洗器中超声提取10min，以15000r/min离心10min，将上清液转移至25mL具塞管中，下层沉淀用丙酮（3.1）重复提取两次，每次2ml，合并上清液，用30mmol/1磷酸二氢钠溶液（3.8）定容至25mL，混匀.取约5mL上述溶液于离心管中.以15000r/min离心15.min，上清液过0.45m有机滤膜后，待用.
5.2测定
5.2.1色谱条件
5.2.1.1色谱柱：C柱：250mm×4.6mm（内径），颗粒直径5m，或相当者.
表1方法的梯度洗脱条件
时间/min A/% 45 0 20 6 20 15 10 16 21 10 24 45 45 28B/% 55 80 80 90 90 55 55
5.2.1.3流速：1.OmL/min.5.2.1.4检测波长：230nm.5.2.1.5色谱柱温：30C.5.2.1.6进样量：20g
5.2.2标准工作曲线绘制
取浓度为0.2mg/L 0.5mg/L，2mg/L，5mg/L 20mg/L的标准工作溶液（3.11)，按色谱条件（5.2.1）行测定，以色谱峰的峰面积为纵坐标，对应的溶液浓度为横坐标作图，绘制标准工作曲线.标准物质色谱图参见附录A的图A.1.
5.3试样测定
由色谱峰的峰面积可从标准曲线上求出相应的色谱峰浓度.样品溶液中的氯噻酮和盼噻嗪的响应值均 试样溶液（5.1）注入液相色谱仪，按色谱条件（5.2.1）进行测定，记录色谱峰的保留时间和峰面积，应在标准工作曲线浓度范围之内，氯噻酮和盼噻嗪含量高的试样可取适量试样溶液用流动相稀释后进行测定.必要时，阳性样品需用其他方法进行确认试验.
5.4空白试验
除不称取试样外，均按上述操作步骤进行.
6结果计算
结果按式（1）计算（计算结果应扣除空白值）：
(1)
式中：
X一样品中氯噻酮或盼碳嗪的质量浓度，单位为毫克每千克（mg/kg）；-标准曲线计算所得空白样品中氯噻酮或盼噻嗪的浓度、单位为毫克每升（mg/L）； c.--标准曲线计算所得氯噻酮或盼噻嗪的浓度，单位为毫克每升（mg/L）；V一样品稀释后的总体积，单位为毫升（mL）；m一样品质量，单位为克（g）.
