中华人民共和国国家标准
GB/T28070-2011
Detection and identification of Tilletia walkeri Castlebury& Carris
中国国家标准化管理委员会 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局 发布
前言
本标准按照GB/T1.1-2009给出的规则起草. 本标准由全国植物检疫标准化技术委员会（SAC/TC271）提出并归口本标准主要起草人：章桂明、程颖慧、王颖、陆清、凌杏元、龙海、陈枝楠、刘新娇、仲建忠、杨伟东、缘建锟.
黑麦草腥黑粉菌检疫鉴定方法
1范围
本标准规定了黑麦草胆黑粉菌的检疫鉴定方法和检疫鉴定流程，明确了取样和样品保存方法.本标准适用于黑麦草传带黑麦草腥黑粉菌的检测以及小麦中污染的黑麦草握黑粉菌的检测.
2规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的.凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件.凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括的修改单）适用于本文件.
GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法GB/T18085植物检疫小麦矮化腥黑穗病菌检疫鉴定方法 GB/T19495.2转基因产品检测实验室技术要求SN/T2122进出境植物及植物产品检疫抽样
3黑麦草黑粉菌基本信息
中文名：黑麦草腥黑粉菌，
学名：Tileria wafkeri Castlebury &. Carris(简称TW).
英文名：ryegrass bunt.
菌科Tilletiaceae、腥黑粉菌属Tiletia 属真菌界Fungi、担子菌门 Basidiomycota、黑粉菌纲Ustomycetes、黑粉菌目Ustilaginales、腥黑粉
病粒及附着于健康种子表面的冬孢子是病原菌进行远距离传播的主要途径，由于该病局部侵染的特性，在收获期间很难有效的清除混杂于健康种子中的病粒，因而病粒可随同小麦或黑麦草的资源性引种或科研性引种而进行远距离传播.
黑麦草程黑粉菌的其他信息参见附录A.
4方法原理
根据黑麦草程黑粉菌的生物学和形态学特征以及分子生物学特征，应用相关仪器，包括显微镜和PCR仪等对小麦印度黑穗病菌进行鉴定.
5检疫鉴定流程
检疫鉴定流程见图1.
图1黑麦草醒黑粉病菌检疫鉴定流程图
6取样方法
散装船运黑麦草种子及小麦参照GB/T18085取样方法进行取样.袋装黑麦草及小麦参照SN/T2122取样方法进行取样.
7主要仪器设备和试剂
7.1主要仪器设备
7.1.1摇床.7.1.2显微镜.7.1.3纯水器.7.1.4测序仪.7.1.5电泳仪. 7.1.6低湿冰箱.7.1.7显微操作仪.7.1.8超净工作台.7.1.9高压灭菌锅.7.1.10光照培养箱. 7. 1. 11 旋涡振荡器，7.1.12普通离心机.7.1.13冷冻干燥机.7.1.14凝胶成像仪.7. 1. 15 5核酸蛋白分析仪.7.1.17 7.1.16PCR仪（常规PCR仪、实时荧光PCR仪）. 破壁针（具有平截切面的针，能将孢子压碎）.7.1.18培养Ⅲ（9 cm）.7. 1. 19筛网（40 pm、20 pm）.7.1.20孔径100μm的毛细管. 7.1.21锥形瓶（250mL、500mL）.7.1.22盖玻片（18mm×18mm）.7.1.23PCR反应管（0.2mL，0.5mL）.7.1.24载玻片（25mm×76mm），厚（0.8mm~1.0mm）.7.1.26可调微量移液器（2μL，10pL，20pL，100μL，200μL，1000μL）
7.2主要试剂
除另有规定外，试剂均为分析纯或生化试剂.7.2.5甲酰胺.7.2.7无水乙醇.
7.2.1三氯甲烷. 7.2.2异戊醇，7.2.3异丙醇，7.2.4酯酸钠.7.2.670%乙醇.7.2.8Tris饱和酚.7.2.9Tag酶.
