中华人民共和国国家标准
GB/T28086-2011
Detection and identification of Longidorus spp. as virus vectors
中国国家标准化管理委员会 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局 发布
前言
本标准按照GB/T1.1-2009给出的规则起草.
本标准由全国植物检疫标准化技术委员会（SAC/TC271）提出并归口.
本标准起草单位：中华人民共和国珠海出人境检验检疫局、中华人民共和国宁波出人境检验检疫局、中华人民共和国云南出人境检验检疫局和珠海市质量计量监督检测所.
本标准主要起草人：陈其文、张卫东、廖力、蒋立琴、顾建锋、杜宇、徐森锋、迟远丽、乐海洋、张慧娟、彭仁.
长针线虫属（传毒种类）检疫鉴定方法
1范围
本标准适用于植物根系、土壤及裁培介质中长针线虫属传毒种类的检疫鉴定. 本标准规定厂长针线虫属传毒种类的检疫鉴定方法.
2规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的.凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件.凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括的修改单）适用于本文件.
GB/T24830拟毛剩线虫属（传毒种类）检疫鉴定方法SN/T1157进出境植物苗木检疫规程SN/T1158进出境植物盆景检疫规程
3长针线虫属（传毒种类）基本信息
中文名：长针线虫属传毒种类.
学名：Longidorus spp..
英文名：virus vectors species of Needle nematodes.
剑线虫属传毒种类隶属于线虫门Nematoda（Rudolphi，1808）Lankester，1877、无侧尾腺纲Adeno-phorea Linstow，1905、矛线目Dorylaimida Pearse，1942、长针线虫科 1ongidoridae(Thorne1935）Fil-ipjev，1934、长针线虫属Longidoras（Micoletzky，1922）Filipjev，1934.
长针线虫属传毒种类是植物根系的迁移性外寄生线虫，主要依靠土壤、介质土和带根苗木、球茎等寄主植物材料的调运传播.
长针线虫属传毒种类的其他信息参见附录A.
4方法原理
将现场检疫中发现的介质土、土壤以及植株，经漏斗法或浅盘法分离获得线虫，制成临时或永久玻片，显微镜下对雌、雄虫主要鉴定特征仔细观察并测量数据，依据本标准描述的长针线虫属传毒种类形态鉴定特征与其基本生物学信息按系统分类学方法，鉴定其生物学种类.
5仪器和用具
仪器和用具按GB/T24830执行.
6试剂
试剂按GB/T24830执行，分样筛选用300目.
7现场检疫
对苗木、球茎等寄主材料进行检查，注意观察苗木的生长状况、根部为害状，以及是否带介质、土壤等.重点选取植株矮化、萎缩，根畸形、粗短、侧根消失等症状的苗木及根际介质或土壤，如无可疑症状则按要求随机取样.取样后立即置密封塑料袋，标记后及时送实验室检测.
具体抽样比例按SN/T1157和SN/T 1158执行.
8实验室检验
8.1线虫分离
线虫分离按GB/T24830执行.
8.2体视显微镜镜检
分离获得的水样在10倍以上体视显微镜检查，观察线虫的形态结构.
8.3标本制作
标本制作按GB/T24830执行.
8.4生物显微镜观察、摄影和测量
应针对雌、雄虫主要鉴定特征仔细观察并显微摄影，重点包括整体形态、齿尖针、前唇区形态、侧器囊形态、雌虫阴道骨化结构及雄虫交合剩等，并在每张图片上加相应标尺.需观察、测量获得多岐检索表中各鉴定特征数字代码（参见附录B），并计算α、b、c和V等值.
9形态鉴定特征
9.1长针线虫属鉴定特征
9.1.1雌虫
虫体细长，热杀死后虫体直到弯成"C"形，有1排～2排体孔.头部圆，连续或缩：侧器口小孔状、不明显，侧器囊袋状.齿尖针长、针状，不高度硬化，齿尖针基部平滑、不分叉，齿托长约为齿尖针长的三分之二、中等硬化，基部略厚但不呈凸缘状：齿针导环为单环，距头端的距离通常小于2倍头宽，偶尔位置较后（距头端距离达齿尖针长的40%）：有1个背食道腺和2个腹亚侧腺，背食道腺细胞核位于背食道腺开口后一段距离、小于腹亚侧腺细胞核：阴门横裂、位于虫体中部，双卵巢对伸、转折.尾短，呈 弓圆锥形，端细圆或宽圆，有儿对尾孔.
9.1.2雄虫
长针线虫属部分种类雄虫未发现，雄虫双生殖腺、对钟，后精巢转折，交合刺租大、向腹面弯，交合刺顶端部有短的附导片，斜纹交配肌显著、延钟至泄殖腔前儿倍体宽处泄殖腔区有1对交配乳突（有的种双排.
长针线虫属与近似属的区别见表1.
表1长针线虫科各属的主要鉴别特征
线虫种类鉴定特征 长针线虫属 类长针线虫属 拟长针线虫属 剑针线虫属 拟剑针线虫属 剑线虫属Longidorus Longidoroides Paralongidorus Xiphidorus诱导环 单环，位于 单环.位于 单环、位于 单环，位于 单环，位于 于齿尖针 双环，位齿尖针前部 齿尖针前部 齿尖针前部 齿尖针后部 齿尖针后部 后部齿尖针基部 平滑 平潜 平滑或叉状 又状 又状 又状齿托基部 不呈凸缘状 不呈凸缘状 不是凸缘状 凸缘状 凸缘状 凸缘状器口 孔状 横裂缝状 模裂缝状 孔状 小裂缝状或 宽横裂缝状 缝状 宽横裂漏斗状至例 调斗状至侧器裳 袋状 袋状 马橙状 袋状 马证状 例马橙状背食道腺 小位于背 小位于背 小位于背 小位于宵 小位于背 大、紧接核大小及其 食道酿开口后 食道原开口后 食道腺开口后 食道酿开口后 食道腺开口后 背食道康位置 段距离 一段距高 段距离 -段距离 段距离 开口
9.2长针线虫属传毒种类形态鉴定特征（参见附录B和附录C）
9.2.1阿普尔长针线虫（Longidorus apulus Lamberti，1977）
雌虫虫体细长（5.1mm~9.1mm），热杀死后呈"C”字形：唇区扁平，有轻微举缩，唇区宽度14 pm~17pm，虫体前端至诱导环的长度27μm~34μm:侧器囊大多对称二裂；齿尖针弱，长度为 91pm~112μm，齿托较长60ym~88μm；尾部呈网锥形.雄虫稀少
9. 2. 2Longidorus arthensis Brown 1994
雌虫虫体细长（5.1mm~7.6mm）热杀死后虫体弯曲呈“C"形：唇区钝圆，有轻微缩，唇区的宽度大约为16um；侧器囊大而明显，存在二裂，延伸到口腔到导环距离的三分之二处；尾部钝圆锥形，尾 长约为肛门处体宽.雄虫有发现，交合刺典型矛形.
9.2.3浙狭长针线虫（Longidorus atfenuates Hooper，1961）
雌虫虫体细长（5.2mm~7.5mm），热杀死后，虫体后半部形成稍大的弯曲成“C"形.头部扁平，稍阔，有明显缩，举缩处体宽为导环处体宽四分之三.侧器囊大，基部对称二裂，延伸到口腔到导环距 离的二分之一，侧器囊几乎围绕着头部，侧器孔很小：齿尖针细长，是齿托的2倍长，并与齿托有简单的交叉：尾部背面凸起，呈锥形，尾长是肛门处体宽的1.5倍～1.75倍.雄虫稀有，交合刺长45um.侧附导片末端二裂.
9.2.4短环长针线虫（Longidorus brevianmlatus Norton，1975）
摊虫虫体细长（4.0mm~5.9mm），热杀死后常弯曲成"C"形，有时不规则：体细，平均体宽50μm（除尾端部分）：阴门处有轻微突起，阴门孔倾斜：唇区肩平，有缩：侧器囊二裂，延伸到儿乎接近导环，侧气孔模精，位于唇区后部：尾部圆锥形，但在有些成虫尾端有短而宽的突起.雄虫未发现.
