中华人民共和国国家标准
GB/T28091-2011
Detection and identification of Xiphinema spp. as virus vectors
中国国家标准化管理委员会 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局 发布
前言
本标准按照GB/T1.1-2009给出的规则起草.
本标准由全国植物检疫标准化技术委员会（SAC/TC271）提出并归口.
本标准起草单位：中华人民共和国珠海出入境检验检疫局、浙江大学和珠海市质量计量监督检测所.
本标准主要起草人：张卫东、郑经武、廖力、蒋立琴、张燕、郭恺、陈其文、乐海洋、徐泰锋、迟远丽、吴长坤、彭仁.
剑线虫属（传毒种类）检疫鉴定方法
1范围
本标准规定了剑线虫属传毒种类的检疫鉴定方法.本标准适用于植物根系、土壤及裁培介质中剑线虫属传毒种类的检疫鉴定.
2规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的.凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件.凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括的修改单）适用于本文件.
GB/T24830拟毛剩线虫属（传毒种类）检疫鉴定方法SN/T1157进出境植物苗木检疫规程SN/T1158进出境植物盆景检疫规程
3剑线虫属（传毒种类）基本信息
中文名：剑线虫属（传毒种类）.
学名：Xiphinema app..
英文名：virus vectors species of Dagger nematode
剑线虫属传毒种类隶属于线虫门Nematoda（Rudolphi，1808）Lankester，1877、无侧尾腺纲Ade-nophorea Linstow，1905、矛线目Dorylaimida Pearse， 1942、长针线虫科1ongidoridae(Thorne，1935)Filipjev，1934剑线虫属Xiphinema Cobb，1913.
剑线虫传毒种类是植物根系的迁移性外寄生线虫，主要依靠土壤、介质土和带根苗木、球茎等寄主植物材料的调运传播.
剑线虫属（传毒种类）的其他信息参见附录A.
4方法原理
将现场检疫中发现的介质土、土壤以及植株，送实验室经漏斗法或浅盘法分离获得线虫，制成临时或永久玻片，显微镜下对雌、雄虫主要鉴定特征仔细观察并测量数据，依据本标准描述的剑线虫属传毒种类形态鉴定特征与其基本生物学信息，按系统分类学方法，鉴定其生物学种类.
5仪器和用具
仪器和用具按GB/T24830执行.
6试剂
试剂按GB/T24830执行，分样筛选用300目.
7现场检测
对苗木、球茎等寄主材料进行检查，注意观察苗木的生长状况、根部为害状，以及是否带介质、土壤等.重点选取植株矮化、萎缩，根部肿大、租短、畸形，侧根丛生等症状的苗木及根际介质或土壤，如无可疑症状则按要求随机取样.取样后立即置密封塑料袋，标记后及时送实验室检测.
具体抽样比例按SN/T 1157和SN/T 1158执行.
8实验室检测
8.1线虫分离
线虫分离按GB/T24830执行.
8.2体视显微镜镜检
分离获得的水样在10倍以上体视显微镜检查，观察线虫的形态结构.
8.3标本制作
标本制作按GB/T 24830执行.
8.4生物显微镜观察、摄影和测量
应针对雌、雄虫主要鉴定特征仔细观察并显微摄影，重点包括整体形态、头区轮廊、齿尖针、尾部形态、雌虫生殖系统及雄虫交合刺等，并在每张图片上加相应标尺，测量并计算a、b、c和V等值.
9形态签定特征
9.1剑线虫属形态鉴定特征
9.1.1雌虫
虫体细长，热杀死后虫体直或腹弯或呈“C"形、开螺旋形.头部网、连续或蕴缩；侧器口宽裂缝状，器囊倒马锥形或漏斗形；齿尖针细长、针状、高度硬化，齿尖针基部呈叉状，齿托基部呈显著的凸缘状：齿针导环为双环、后环高度硬化，导环位于齿尖针后部靠近齿尖针与齿托相连接处：背食道腺核位于背食道腺开口附近、大于腹亚侧腺核.雌虫生殖腺有4种类型：前后生殖腺均发育完全的双生殖腺型、前 生殖腺退化但结构尚完整的双生殖腺型、前生殖腺退化且结构不完全的假单生殖腺型和无前生殖腺的单生殖腺型等，有些种类的子宫内有骨化结构.尾部形态多样：短、半球形、有或无1个指状尾突，圆锥形，前部圆锥形后部渐变细成丝状等.
9.1.2雄虫
雄虫（有些种至今未发现）体长、形态、头部、口针、食道和尾形的特征均似雌虫，双生殖腺、对伸，交合刺矛线型、租壮、有侧附导片，斜纹交配肌发达、由泄殖腔向前延伸泄殖腔区有1对交配乳突，其前一段距离有1列腹中交配乳突（最多7个）.
9.2剑线虫属传毒种类的形态鉴定特征
剑线虫属传毒种类形态鉴定特征参见附录B和附录C.
9.2.1美洲剑线虫（X.americanumCobb，1913）
长约为72pm，基部分叉：齿托有凸缘，长约为45μm～47μm:双生殖腺，在输卵管处回折，子宫伸长， 雌虫虫体细长（1.4mm~1.7mm），形成一个开阔的螺旋形：唇区半球形、轻微膨胀：齿尖针中空，窄、内无特殊分化结构：尾呈圆锥形，背面有一大弯，末端半球形，末端角质层无盲管，雄虫极少，虫体与雌虫相似但后三分之一部分比雌虫弯曲更大：精巢成对，伸辰面对称；交合刺很直，骨化长为29μm.
9.2.2贝克剑线虫（X.bakeriWilliams，1961）
雌虫虫体细长（3.7mm~4.7mm），热杀死后弯曲成钩状：唇区与体壁不连续，轻微缩：口针细长，齿针和齿托部之和超过200μm；阴门位置较前，双卵巢，两侧生殖系统结构完整，长度相同或儿乎相同，无子宫分化：尾短圆锥形，末端有一指状突，雄虫极少发现.
9.2.3拜西尔剑线虫（X.basiri Siddiqi.1959）
雌虫虫体细长（2.9mm~3.5mm），弯曲成钩状或螺旋形；唇区轻微缩，齿尖针和齿托长度分别为120μm~132μm和54pm~70μm：生殖腺成对，两生殖系统结构完整，长度相同或儿乎相同，子宫存在假"Z"字形结构：尾短圆锥形，末端有一明显指状突.雄虫稀少.
9. 2. 4 X. brevicollum Lordello 1961
雌虫虫体细长（1.8mm～2.2mm），弯曲呈螺旋形或钩状：唇区与体壁不连续，缩：齿尖针和齿托之和在86pm～150μm之间；双生殖腺，两侧生殖系统结构完整长度相同或儿乎相同，子宫无分化器官：尾短圆锥形或半圆形，背面呈一个突圆形的大弯，腹面呈指状，尾尖钝圆.
9.2.5加州剑线虫（X.californicum Lamberti.1979）
雌虫虫体细长（1.8mm~2.2mm），弯曲呈螺旋形或钩状：唇区与体壁不连续，维缩：齿尖针长83pm～98μm：双生殖腺，对伸，子宫无分化，"Z"字型器官缺失；尾短圆锥形至半调形，背面呈一个突圆形的大弯，腹面呈指状，尾尖圆锥形，末端角质层无盲管，
9.2.6考克斯剑线虫（X.coxi Tarjan，1964）
雌虫虫体细长（3.1mm~4.0mm），热杀死后呈"C"字形：唇区轻微缩，齿尖针和齿托长度分别为113μm~127μm和68μm~82μm；双生殖腺，两侧生殖系统结构完整，长度相同或儿乎相同，子宫存在假"Z"字形结构：尾短圆锥形，末端有一指状突.雄虫稀少.
9.2.7裂尾剑线虫（X.diversicaudatumMicoletzky，1927）
雌虫虫体细长（4.0mm~5.5mm），热杀死后体弯曲：唇区扁，光滑，缩：齿尖针平均长度为143μm：双卵巢，折叠，两侧生殖系统结构完整，长度相同或儿乎相同，每个子宫有一个明显的假"Z"字形器官；尾部尾短圆锥形，末端有一指状突.雄虫虫体与雌虫类似，齿尖针长134um，基部有分叉，齿托 长75um，导环距齿针尖前端125μm；交合剩强大，中央弯曲，长度为75μm.侧引带15μm.
9.2.8标准剑线虫（X.indexThorn，1950）
齿尖针中空，平均长度为126μm，基部分叉与齿托形成牢固的连接，齿托长约为70um，有3个大的凸 雌虫虫体为长圆柱形（2.8mm~3.6mm），形成一个开阔的螺旋形：唇区为半圆形，有轻微缓缩；缘：生殖腺成对，在输卵管处回折，子宫腔高度肌肉化，长与体宽接近，无子宫分化，“Z”器官缺失：尾短圆锥形至半圆形，末端有圆形或半圆形指状突，背面呈一个突圆形的大弯，腹面呈指状.雄虫数量极少，
