中华人民共和国国家标准
GB/T28097-2011
Detection and identification of Venturia inaequalis(Cooke）Wint.
中国国家标准化管理委员会 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局 发布
前言
本标准按照GB/T1.1-2009给出的规则起草.
本标准由全国植物检疫标准化技术委员会（SAC/TC271）提出并归口
本标准起草单位：中华人民共和国安徽出人境检验检疫局、安徽农业大学、中华人民共和国云南出人境检验检疫局.
本标准主要起草人：姚剑、檀根甲、温劲松、余晓峰、张萍、李刚、郑海松、李云飞、方元炜、张道环、李生贵、段禄华.
苹果黑星病菌检疫鉴定方法
1范围
本标准规定了苹果黑星病菌的检疫鉴定方法.
本标准适用于苹果属果树、果实、种苗及其他材料的检疫和鉴定.
2规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的.凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件.凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括的修改单）适用于本文件.
SN/T2122进出境植物及植物产品检疫抽样
3苹果黑星病菌基本信息
中文名：苹果黑星病菌.
学名：
有性型：Ventaria inaequalis（Cooke）Wint.
无性型：Spilocaea pomi Fr.
病害英文名：apple scab，black spot.
异名：
有性型：Sphaeria cinerascens Fr.Sphaerella inaequalis Cooke. Sphaerella cinerascens Fuck.Endostigme inaequalis (Cooke) Syd.Spilosticta inaequalis (Cooke) Petr.Endostigme cinerascens (Fleiseh) Jorst.无性型：Fusicladium dendriticum(Wallr.)Fuck. Cla porium dendriticums Wallr.
根据《真菌词典>第九版（2001），有性型属真菌界Fungi，子囊菌门Asycota，子囊菌纲Asy-cetes，座囊菌亚纲Dothideomycetidae 格孢腔菌目Pleosporales，黑星菌科Venturiaceae，黑星菌属Venturias
无性型属环黑星孢属 Spilocaea，仁果环黑星孢Spilocaea pomiFr.（=Fusicladium dendriticum(Wallr. ) Fuck. ).
苹果黑星病菌的其他信息参见附录A.
4方法原理
经现场查验、取样后，实验室用显微镜等仪器设备进行检测，根据其危害症状、形态学特征进行结果判定.
GB/T 28097-2011
5仅器及用具
5.1仪器显微镜、超净工作台、高压灭菌锅、生物培养箱.
5.2用具解剖刀、镊子.
6试剂和培养基
6.1试剂
4%次氯酸钠，70%酒精.
6.2培养基
PDA培养基，pH值调节至5.5~6.5.
7现场检验
7.1抽样方法
按 SN/T 2122进行抽样.
7.2症状检查
逐一对抽检样品进行症状检查，并将疑似感病样品带回实验室作进一步检验.
7.2.1叶片检查
叶片上病斑多先从叶片正面发生.病原菌从侵人点放射状扩展，形成病斑.叶片正面病斑初为涉黄绿色，色泽逐渐变深，后变为黑色，圆形、近圆形，直径3mm~6mm或更大，病斑周围有明显的边缘，老叶上尤甚.幼叶病斑多表面粗糙羽毛状，成叶病斑边缘明显面不整齐，有时表生白色棉絮状物.病斑略成圆形，表生黑福色霉状物，叶片正面对应部位褪绿，枯死，侵染较晚的，仅在叶片背面产生黑色多角 多由叶片正面向上突起，其背面形成环状凹入，呈泡斑状，有时病斑脱落穿孔.叶背面侵染形成的病斑形病斑.叶片上病斑可互相汇合，占据大部叶面，叶片扭曲、卷曲，进面干枯并早期落叶.
在叶柄和主叶脉上的病斑黑色，较小，小点状、梭形或长条形，往往导致叶片变黄脱落.
7.2.2花器检查
发病花瓣褪色，萼片上生灰色病斑，但常被萼片绒毛覆盖，不易察觉.花梗上病斑还可环切花梗造成落花.
7.2.3果实检查
着果实膨大，病斑逐渐扩大并凹陷，表层本栓化，边缘开裂，有不规则细小裂纹，整体疮痴状.病果开裂、 果实从幼果至成熟期均可被侵染，果面病斑初为黑色星状斑点，很小、微凸，上生有绒状菌丝体，随畸形.在秋季被侵染的果实，病面密生黑色或褐色小点，不表现典型症状，但在贮藏期病斑逐渐扩大.
7.2.4苗木、接穗等繁殖材料检查
些感病的品种上，病斑并不消失，使病枝呈泡肿状，另外，芽鳞内也有越季存活的菌丝体或分生孢子. 1年生枝条被侵染，常发生在离枝端大于10cm的部位，病斑较小，枝条长大后，病斑消失，但在一
8实验室检测
8.1切片检测
选取疑似感病植物组织病健交界处切片，移于载玻片中央的水滴中，镜检，观察子实体特征.
8.2分离培养检测
选取疑似感病植物组织，剪取病健交界处组织若干小块，约2mm×2mm，在70%酒精中浸湿一下后立即移入4%次氯酸钠中消毒处理1min，用无菌水洗3次，放于PDA平板培养基上，每Ⅲ5块，置于16C~20C，光照强度为6001x、光周期为12h条件下培养.观察病菌形态特征.
9签定特征
9.1病菌形态特征
苹果黑星病菌有性型Venturia inaequalis（Cooke）Wint.子囊座在落叶上形成，埋生或近表生叶肉（6pm~12μm），有短柄，壁薄.子囊内含8个子囊孢子，成熟子囊孢子卵脚形，暗褐色，双胞，顶细胞较（Walr.）Fuck.分生孢子梗丛生、淡褐色至橄榄色，短棒状，直立或弯曲，不分枝，单胞，0个～2个隔膜，状，顶端略尖，初无色，涉褐色至橄榄色，初单胞，后生1个隔膜，隔膜处稍缢缩，孢基平截，表面光滑或具小疣突，大小（12.0μm~26.0gm）×（5.5pm~11.5gm）.分离培养的分生孢子比切片观察的略大（参见附录B）.
组织中，黑褐色，球形、近球形，直径约90μm～100pm，孔口处稍有乳状突起，具刚毛，刚毛长25pm~75μm.子囊座内产生多数子囊，处于不同发育阶段.子囊长棍棒形，无色，大小（55μm～75μm）×小，基部细胞较大，大小（11pm~15μm）×（4m~8pcm）.无性型Favicladium dendriticam
9.2病菌培养性状
菌株在PDA培养基上培养4d后，开始形成灰白色菌落.4周后，菌落呈不规则形或圆形，直径约20mm，平铺状橄榄色、灰色或黑色，有时被茸毛，菌丝初无色后变为橄榄色.
9.3与梨黑星病菌Venturin pirina（Cooke）Adh.的区别
梨黑星病菌有性型孢子囊棍棒形，子囊孢子顶细胞较大，基部细胞较小；无性型分生孢子梗罕见有隔膜梗壁上有齿状或疣状突起，分生孢子单孢，两端略尖（参见附录C）.
10结果判定
如有7.2.1~7.2.4描述中任一症状，且切片或分离培养观察的病菌形态特征与描述的病原有性型或无性型特征相符，可判定为苹果黑星病菌.
