中华人民共和国国家标准
GB/T28984-2012
Detection and identification of banana bract mosaic virus
中国国家标准化管理委员会 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局 发布
前言
本标准按照GB/T1.1一2009给出的规则起草.
本标准起草单位：中华人民共和国宁波出人境检验检疫局、中华人民共和国上海出人境检验检疫局、中国检验检疫科学研究院、中华人民共和国浙江出人境检验检疫局.
本标准主要起草人：闻伟刚、郭立新、杨翠云、陈先锋、雷荣、张永江、张明哲、徐瑛、崔俊霞、张慧画.
香蕉苞片花叶病毒检疫鉴定方法
1范围
本标准规定了香蕉苞片花叶病毒血清学和分子生物学特征的检测方法.
虫等传播媒介中该病毒的检测.
2香蕉苞片花叶病毒基本信息
中文名：香蕉苞片花叶病毒学名:banana bract mosaic virus缩写：BBrMV属马铃薯Y病毒属（Potyvirus)，香蕉苞片花叶病毒其他信息参见附录A
3方法原理
利用基于抗原抗体反应的双抗夹心酶联免疫吸附测定（Double antibody sandwich enzyme-linkedimmunosorbent assay，DAS-ELISA）、体外DNA合成技术的反转录聚合酶链式反应（Reverse transcription polymerase chain reaction，RT-PCR）、实时荧光反转录聚合酶链式反应（real-timefluorescent RT-PCR）进行检测鉴定.
4仪器设备、用具和试剂
4.1仪器设备
常规PCR仪、实时荧光PCR仪、超净工作台、电子天平（感量：0.001g）、电泳仪、电泳槽、凝胶成像系统、高速冷冻离心机、超低温冰箱（一80C）、高压灭菌锅、小型食品加工机、微波炉、酶标仪.
4.2用具
RNase 离心管、PCR管和研钵等. 可调式微量移液器（2L.10L、100yL200μL、1 000L5000gL）及相应的无RNase吸头、无
4.3试剂
主要试剂和缓冲液见附录B和附录C.
5检测
5.1样品制备
取0.5g~10g畸形、变色等症状的叶片或其他植物组织，在研钵或小型食品加工机中充分研磨，
取五分之一量的均匀后样品，转人离心管中，按1110（质量：体积）加人样品提取缓冲液振荡混匀.媒DAS-ELISA、RT-PCR和实时荧光RT-PCR检测租提液.
注：提取液在3h内使用.否期保存在《C条件下.
5.2检测方法
5.2.1双抗体酶联免疫吸附测定方法（DAS-ELISA）
对照，用样品提取缓冲液作空白对照.其中，阴性对照材料应该尽量与所检测样品一致.
具体操作步骤见附录B，当使用商品化检测试剂盒时，参照试剂盒使用说明进行操作.
5.2.2RT-PCR方法
RT-PCR检测应设置对照，用健康的植物组织作阴性对照，用感染BBrMV的植物组织作阳性对照，用 ddH-O 作空白对照.
具体操作步骤见附录C.当使用商品化检测试剂盒时，参照试剂盒使用说明进行操作.
5.2.3实时荧光RT-PCR方法
实时RT-PCR检测应设置对照，用健康的植物组织作阴性对照用感染BBrMV的植物组织作阳性对照，用ddH：O作空自对照.
具体操作步骤见附录D.当使用商品化检测试剂盒时，参照试剂盒使用说明进行操作.
6结果判定
样品经DAS-ELISA与RT-PCR检测，结果均呈阳性，可判定样品携带香蕉苞片花叶病毒.
样品经DAS-ELISA与实时荧光RT-PCR检测，结果均呈阳性，可判定样品携带香蕉苞片花叶病毒.
7样品保存与记录
7.1样品保存
经检测确定携带香蕉苞片花叶病毒的样品保存在一80C冰箱中，并做好登记和标记工作.样品保存期限至少1年.
7.2结果记录与资料保存
完整的实验记录包括：样品的来源、名称、唯一性标识、检测时间、地点、方法和结果等.血清学测定需有酶联反应吸光值的原始数据，RT-PCR检测需有电泳结果图片，实时荧光PCR需要有荧光曲线图与Ct值.结果记录与资料保存期限至少1年.
附录A
香蕉苞片花叶病毒相关资料
A.1名称
中文名：香蕉苞片花叶病毒学名：banana bract mosaie virus缩写：BBrMV分类地位：马铃薯Y病毒属（Patyvirux）
A.2寄主范围
目前只发现芭蕉属（Masa spp.）植物为其自然寄主.
A.3为害症状
病毒侵染香蕉植株后，病叶上沿着叶柄产生深绿色或褐色的梭条斑.而病株花序苞片上则出现黑色斑点，这些症状常常十分明显，引起香蕉减产和品质下降.
A.4分布地区
该病毒主要分布于菲律宾和印度等国，在我国尚未见发生.
A.5传播方式
可由玉米澄管蚜（Rhopalosiphurn maidix）和棉蚜（Aphis gossypi）以非持久方式传播，长距离扩散则随感病植株的无性繁殖材料传播.
A.6粒体形态
病毒粒子线形，长660nm~760nm，直径12nm.
A.7基因组
能被SDS降解，用硫酸艳溶液提取时，多数粒子的相对分子质量为38KDa，少数为55KDa：用蔗糖溶液提取时，除上述分子外，还有少数相对分子质量为66KDa和21KDa的分子存在.
