中华人民共和国国家标准
GB/T31270.18-2014
化学农药环境安全评价试验准则 第18部分：天敌两栖类急性毒性试验
Test guidelines on environmental safety assessment for chemical pesticidesPart 18:Amphibian acute toxicity test
中国国家标准化管理委员会 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局 发布
前言
第2部分：水解试验： 一第1部分：土壤降解试验；第3部分：光解试验：第4部分：土壤吸附/解吸试验；第5部分：土壤淋溶试验； 一第6部分：挥发性试验：第7部分：生物富集试验：第8部分：水-沉积物系统降解试验；-第9部分：乌类急性毒性试验；第11部分：家蚕急性毒性试验； 第10部分：蜜蜂急性毒性试验；第12部分：鱼类急性毒性试验；第13部分：涵类急性活动抑制试验；第14部分：藻类生长抑制试验；第16部分：土壤微生物毒性试验； 第15部分：蚯蚂急性毒性试验；第17部分：天敌赤眼蜂急性毒性试验：一第18部分：天敌两柄类急性毒性试验；一第19部分：非靶标植物影响试验； 第20部分：家畜短期饲喂毒性试验；第21部分：大型甲壳类生物毒性试验.本部分是GB/T31270的第18部分.本部分按照GB/T1.1一2009给出的规则起草.请注意本文件的某些内容可能涉及专利.本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任. 本部分由中华人民共和国农业部提出并归口，本部分负责起草单位：农业部农药检定所、环保部南京环境科学研究所.本部分主要起草人：周军英、曲蔓亮、单正军、田丰、俞瑞鲜、郝身伟、陈朗.
GB/T31270《化学农药环境安全评价试验准则》分为21个部分：
第18部分：天敌两栖类急性毒性试验 化学农药环境安全评价试验准则
1范围
GB/T31270的本部分规定了天敌两栖类急性毒性试验的材料、条件、操作、质量控制、数据处理、试验报告等的基本要求.
本部分适用于为化学农药登记而进行的天敌两栖类急性毒性试验，其他类型的农药可参照使用.
本部分不适用于易挥发和难溶解的化学农药.
2术语和定义
下列术语和定义适用于本文件.
2.1
半致死浓度median lethal concentration
在急性毒性试验中，引起50%的供试生物死亡时的供试物浓度，用LC表示.注：单位为 mg a.i/L
2.2供试物test substance
试验中需要测试的物质.
2.3
化学农药chemical pesticide
利用化学物质人工合成的农药.其中有些以天然产品中的活性物质为母体，进行仿制、结构改造，创新面成，为仿生合成农药.
同义词：有机合成农药synthetic organic Pesticide.
[NY/T 1667.1-2008 定义 2.3.1]
2.4
原药technical material
要时可加入少量的稳定剂. 在制造过程中得到的有效成分及杂质组成的最终产品，不能含有可见的外来物质和任何添加物，必
[NY/T 1667.2-2008 定义 2.5.1]
2.5
制剂formulation product
由农药原药（或母药）和助剂制成使用状态稳定的产品.[NY/T1667.2-2008，定义2.4]
2.6
半静态试验法semi-static test
试验期间每隔一定时间（如24h）更换一次药液，以保持试验药液的浓度不低于初始浓度的80%.
GB/T 31270.18-2014
2.7
静态试验法static test
试验期间不更换试验药液.
2.8
流水式试验法flow-through test
试验期间药液连续更新.
3试验概述
天敌两栖类急性毒性测定方法有静态法、半静态法与流水式试验法三种.应根据供试物的性质采用适宜的方法.分别配制不同浓度的供试物药液，于96h的试验期间每天观察并记录蚪的中毒症状和死亡数，并求出24h、48h、72h和96h的LCs值及95%置信限.
4试验方法
4.1材料和条件
4.1.1供试生物
推荐使用泽蛙（RangLimnocharis）或非洲爪蟾（Xenopuslaeuis）蚌料.具体龄期和适宜水温见附录A，如果选用其他两椭类作为试验材料，应该采用能够满足其生理要求的相应驯养和试验条件，并加以说明.
试验用辨蚌应选用健康无病、龄期一致的鲜蚪.试验前在室内预养3d试验前一天停止喂食，试验中亦不眼食.
4.1.2供试物
0.1 mL(g)/L 农药制剂、原药或纯品.对难溶于水的农药，可用少量对蚌料低毒的有机溶剂助溶，用量不得超过
4.1.3主要仪器设备
主要仪器设备如下：温度计； 溶解氧测定仪：酸度计；-玻璃缸；
4.1.4试验用水
试验用水为经活性炭处理、存放并曝气处理24h以上的自来水或能注明配方的稀释水，水质硬度在10mg/L~250mg/L之间（以CaCO.计），pH在6.0~8.5之间，溶解氧含量不应低于空气饱和值(ASV)的 60%.
4.1.5承载量
静态和半静态试验系统最大承载量为1.0g（受试生物）/L，流水式试验系统承载量可高一些.
4.1.6试验条件
光暗比16h：8h，或者自然光照.
4.2试验操作
4.2.1方法的选择
应根据供试物的特性选择静态试验法、半静态试验法或流水式试验法.如使用静态或半静态试验法，应确保试验期间试验药液中供试物浓度不低于初始浓度的80%.如果在试验期间试验药液中供试物浓度发生超过20%的偏离，则应检测试验药液中供试物的实际浓度并以此计算结果，或使用流动试验法进行试验，以稳定试验药液中供试物浓度.
4.2.2预试验
按正式试验的条件，以较大的间距设置4个～5个浓度组.通过预试验求出蝌蚪最高全存活浓度和最低全致死浓度.
4.2.3正式试验
在预试验确定的浓度范围内以一定几何级差（不超过2.2）设置5个～7个浓度组，并设一个空白对照组，使用有机溶剂助溶的增设溶剂对照组，每个浓度设三个重复.每缸放入10只蚌蚌，试验开始后6h内随时观察并记录试验用蝌料的中毒症状及死亡率，其后于24h、48h.72h和96h观察并记录蚌的中毒症状及死亡率，及时清除死鲜蚪.每天测定并记录试液温度、pH及溶解氧.
4.2.4限度试验
设置上限浓度100mga.i./L，即供试物达100mga.i./L时供试生物死亡率未超过空自对照组，则无需继续进行试验.若供试物溶解度小于100mgai/L，则采用其溶解度上限作为试验浓度.
4.3数据处理
4.3.1统计分析方法的选择
可采用寇氏法、直线内插法或概率单位图解法计算每一观察时间（24h、48h、72h和96h）的天敌两栖类急性毒性的半致死浓度LC，也可采用数据统计软件进行分析和计算.
4.3.2寇氏法
用寇氏法可求出天敌两椭类在24h、48h、72h、和96h的LC值及95%置信限.
LC的计算见式（1）：
式中：
相邻浓度比值的对数；∑P一各组死亡率的总和（以小数表示）.
X.-最高浓度的对数；
95%置信限的计算见式（2）：
标准误的计算见式（3）：
