中华人民共和国国家标准
GB/T 31270.21-2014
化学农药环境安全评价试验准则 第21部分：大型甲壳类生物毒性试验
Guidelines on environmental safety assessment for chemical pesticides-Part 21:Macro-crustacean toxicity test
中国国家标准化管理委员会 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局 发布
前言
GB/T31270《化学农药环境安全评价试验准则》分为21个部分：
一第1部分：土壤降解试验； 第2部分：水解试验：一第3部分：光解试验：第4部分：土壤吸附/解吸试验；一第5部分：土壤淋溶试验： 一第6部分：挥发性试验：第7部分：生物富集试验：第8部分：水-沉积物系统降解试验；-第9部分：乌类急性毒性试验；第11部分：家蚕急性毒性试验； 第10部分：蜜蜂急性毒性试验；第12部分：鱼类急性毒性试验；第13部分：涵类急性活动抑制试验；第14部分：藻类生长抑制试验；第15部分：蚯蚂急性毒性试验； 第16部分：土壤微生物毒性试验；第17部分：天敌赤眼蜂急性毒性试验：一第18部分：天敌两柄类急性毒性试验；一第19部分：非靶标植物影响试验； 第20部分：家畜短期饲喂毒性试验；第21部分：大型甲壳类生物毒性试验.本部分是GB/T31270的第21部分.本部分按照GB/T1.1-2009给出的规则起草.请注意本文件的某些内容可能涉及专利.本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任. 本部分由中华人民共和国农业部提出并归口.本部分起草单位：农业部农药检定所、环境保护部南京环境科学研究所.本部分主要起草人：姜锦林、张燕、续卫利、田丰、刘勇、查金苗、刘茜.
第21部分：大型甲壳类生物毒性试验 化学农药环境安全评价试验准则
1范围
GB/T31270的本部分规定了化学农药对大型甲壳类生物（虾、骚）毒性试验的材料、条件、操作、质量控制、数据处理、试验报告等的基本要求.
本部分适用于为化学农药登记而进行的大型甲壳类生物毒性试验，其他类型的农药可参照使用.
本部分不适用于易挥发和难溶解的化学农药.
2术语和定义
下列术语和定义适用于本文件.
2.1
半致死浓度median lethal concentration
在急性毒性试验中，引起50%供试生物死亡时的供试物浓度，用LC表示.
注：单位为mg a i. /L
2.2
最大可接受毒物浓度maximum acceptable toxicant concentration:MATC
最大允许毒物浓度，这一数值介于最大无影响浓度（NOEC）和最低有影响浓度（LOEC）之间. 全生命周期或部分生命周期的慢性毒性实验得出的对受试生物不造成有害效应的毒物最大浓度或
2.3
供试物test substance
试验中需要测试的物质.
2.4
化学农药chemical pesticide
利用化学物质人工合成的农药.其中有些以天然产品中的活性物质为母体，进行仿制、结构改造，创新面成，为仿生合成农药.
同义词：有机合成农药 synthetic organic pesticide.
[NY/T 1667.1-2008 定义2.3.1]
2.5
原药technical material
在制造过程中得到的有效成分及杂质组成的最终产品，不能含有可见的外来物质和任何添加物，必要时可加入少量的稳定剂.
[NY/T 1667.22008 定义 2.5.1]
2.6
制剂formulation product
由农药原药（或母药）和助剂制成使用状态稳定的产品.
[NY/T 1667.2-2008 定义 2.4]
GB/T 31270.21-2014
2.7有效成分active ingredient:a.i农药产品中具有生物活性的特定化学结构成分. [NY/T 1667.2-2008 定义3.1]
静态试验法static test
试验期间不更换试验药液，
2.10
试验期间药液连续更新.
3试验概述
他规定选择相关方法进行试验，大型甲壳类生物急性毒性测定方法有静态法、半静态法与流水式试验 大型甲壳类生物毒性试验包括急性毒性试验和亚慢性毒性试验方法，根据农药登记管理法规及其法三种.应根据供试物的性质采用适宜的方法.分别配制不同浓度的供试物药液，急性毒性试验在96h的试验期间，于试验开始后的24h、48h、72h和96h观察并记录试验用虾或蟹的中毒症状和死亡数，并分别求出48h和96h的LC值及95%置信限：亚慢性毒性试验推荐试验期限不低于28d，于7d、14d、21d和28d观察并记录虾或蟹的中毒症状、死亡率、蜕壳率和蜕壳间期、体重体长，并计算供 试物对供试生物的MATC范围.
4试验方法
4.1材料和条件
4.1.1供试生物
试验用大型甲壳类生物推荐使用日本沼虾（Macrobrachiamnipponense）、中华锯齿米虾（Neocar-idina denricalara）或中华绒整蟹（Eriocheir sinensis）.试验用沼虾的虾龄期为产出后1个月左右，大 小一致，平均体长（连尾）约2.5cm：试验用米虾推荐使用体长（额角尖端至尾柄末端的长度）为0.5cm~0.8cm的米虾幼苗；试验用蟹的蟹龄约为5个月（扣蟹），大小一致，重量约5g.试验前，供试生物应在实验室条件下预养7d，试验前及试验过程中正常喂食.
4.1.2供试物
农药制剂、原药或纯品.对难溶于水的农药，可用少量对生物低毒的有机溶剂、乳化剂或分散剂助溶，其用量不得超过0.1mL（g）/L.
4.1.3主要仪器设备
玻璃缸、容量瓶、溶解氧测定仪、pH计、温度计、充气泵、温度控制设备等；如用流水式试验方法，可采用流水式试验装置，但应有供试物储备液连续分配和稀释系统，且该装置应有控温、充气和流量控制等装置.
4.1.4试验用水
硬度在10mg/L~250mg/L之间（以CaCO计），pH在6.0~8.5之间，溶解氧不应低于空气饱和值 试验用稀释水为经活性炭处理、存放并曝气处理24h以上的自来水或能注明配方的稀释水.水质（ASV)的60%.
4.1.5承载量
静态和半静态试验系统最大承载量为1.0g（受试生物）/L，流水式试验系统承载量可高一些.
4.1.6试验条件
试验温度（23土1）℃，每日光照与黑暗时间比为14h：10h.
4.1.7试验期限
急性毒性试验期限一般为96h（根据供试物特性可适当延长观察期），亚慢性毒性试验期限不低于28 d.
4.2试验操作
4.2.1急性毒性试验方法
4.2.1.1方法的选择
应根据农药的特性选择静态试验法、半静态试验法或流水式试验法.如使用静态或半静态试验法，应确保试验期间试验药液中供试物浓度不低于初始浓度的80%.如果在试验期间试验药液中供试物浓度发生超过20%的偏离，则应检测试验药液中供试物的实际浓度并以此计算结果，或使用流动试验法进行试验，以稳定试验药液中供试物浓度.
4.2.1.2预试验
一般选择静态试验法，按正式试验的条件，以较大的间距设若干组浓度（如1、10.100mga.i/L)，每处理组放人虾10尾或蟹10只，不设重复，观察并记录受试虾或蟹48h和96h的死亡情况和中毒症状.通过预试验求出受试虾或蟹最高全存活浓度及最低全致死浓度，为正式试验确定浓度范围.
4.2.1.3正式试验
水对照组使用有机溶剂助溶的增设溶剂对照组，每个浓度组设3个重复.每缸放入虾10尾或蟹10只，试验开始后6h内随时观察并记录受试虾或的中毒症状及死亡率，其后于24h、48h、72h和 96h观察并记录受试虾、蟹的中毒症状及死亡数，及时清除死虾或釜.每天测定并记录试液温度、pH及溶解氧.
4.2.1.4限度试验
100 mga.i./L为试验浓度进行试验），如供试生物死亡率未超过空白对照组，可判定供试物对供试生 以供试物的最大水溶解度为限度试验浓度（当供试物的最大水溶解度大于100mga../L时，以物低毒，则无需继续进行试验.试验结果以LC（96h）大于该物质的最大水溶解度或大于100mga.i/L表示.
