中华人民共和国国家标准
GB/T31806-2015
Detection and identification ofPotatovirusV
中国国家标准化管理委员会 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局 发布
前言
本标准按照GB/T1.1-2009给出的规则起草.本标准起草单位：中国检验检疫科学研究院、中华人民共和国云南出人境检验检疫局. 本标准由全国植物检疫标准化技术委员会（SAC/TC271）提出并归口，本标准主要起草人：李桂芬、李曼、马洁、鲁洁、张永江、孔君、魏梅生.
马铃薯V病毒检疫鉴定方法
1范围
本标准规定了植物检疫中马铃薯V病毒的检疫鉴定方法.本标准适用于马铃薯块茎、组培苗等繁殖材料中马铃薯V病毒的检疫鉴定.
2规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的.凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件.凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括的修改单）适用于本文件.
SN/T2122进出境植物及植物产品检疫抽样
3仪器设备及试剂
3.1仪器设备
酶标仪、天平（感量1/10000g）、pH计、微量榨汁机、PCR仪、实时荧光PCR仪、电泳仪、电泳槽、凝胶成像系统、隔离温室、恒温水浴、低温冰箱等.
微量移液器（2L，10pL，20μL，100L，200pL，1000L）、酶联板、研钵、离心管、花盆、灭菌土等.
3.2试剂
酶联免疫吸附测定试剂见附录B，RT-PCR检测试剂见附录C，实时荧光RT-PCR检测试剂见附录D，生物学测定试剂参见附录E.
4抽样与样品制备
4.1抽样
抽样按照SN/T2122的规定进行.
4.2马铃薯块茎样品的制备
将马铃薯块茎播于灭菌土中，于25℃生长并进行症状观察.待长出约10片叶后将表现症状的植株编号，未表现症状的植株分组（10株为一组）并编号.采集叶片用于酶联免疫测定、RT-PCR检测、实时荧光RT-PCR检测及生物学测定.
4.3组培苗样品制备
将每瓶组培苗中的每个植株都进行采样，每瓶组培苗所采样品作为一个加样样品用于酶联免疫测定、RT-PCR检测、实时荧光RT-PCR检测及生物学测定.
GB/T 31806-2015
5检测方法
5.1酶联免疫吸附测定见附录B.
5.2RT-PCR 检测见附录C.
5.3实时荧光RT-PCR检测方法见附录D.
5.4生物学测定
参见附录E.
6结果判定
样品经酶联免疫吸附测定为阴性或RT-PCR检测为阴性或实时荧光RT-PCR检测为阴性，判断待检样品不携带马铃薯V病毒.
样品经酶联免疫吸附测定为阳性，RT-PCR检测或实时荧光RT-PCR检测为阳性，即可判断待检样品携带马铃薯V病毒.必要时可进行生物学测定.
7样品保存与结果记录
7.1样品保存
经检测确定携带马铃薯V病毒的样品应在合适的条件下保存，块茎可在4C保存6个月，组培苗可在一20C或一80C冰箱中保存1年，做好标记和登记工作.
7.2结果记录
完整的记录包括：样品的来源、时间、地点、方法和结果等，并应有经手人和实验人员的签字.酶联测定应有酶联板反应的原始数据，RT-PCR检测应有电泳结果图片，实时荧光RT-PCR检测应有反应原始数据生物学测定应有鉴别寄主的症状照片.
附录A
（资料性附录）
马铃薯V病毒相关资料
A.1背最资料
A.1.1基本信息
学名：PotatovirusV，缩写：PVV 分类地位：马铃薯Y病毒科（Potyviridae），马铃薯Y病毒属（Potyvirus）.
A.1.2方法原理
列进行PCR特异性检测，通过电泳条带大小进行结果判定：根据该病毒核酸序列设计特异性引物和荧 根据马铃薯V病毒与抗体之间的特异性反应，对植物样品进行ELISA检测：根据该病毒核酸的序光探针，通过检测的荧光信号进行结果判定.条件允许的情况下，根据马铃薯V病毒侵染寄主的症状特点，进行生物学检测.
A.2寄主范围
马铃薯V病毒自然侵染仅限马铃薯，
A.3病害症状
侵染的植株叶片灰白，新生叶变小，轻度扭曲，可能发展为花叶和坏死斑.
A.4分布地区
分布于秘鲁、法国、荷兰和英国.
A.5传播方式
蚜虫传播，传播马铃薯V病毒的蚜虫种类为Myzas persicae、Brach ycadas helichrysi、Macrosi-phum eu phorbiae Rkopalosiphoninus latysiphon
A.6粒体形态
线状粒体，直径11nm~13nm，主体长度为760nm.
