中华人民共和国国家标准
GB/T35811-2018
Method for analysis of forestry biomass-Determination of starch content
中国国家标准化管理委员会 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局 发布
前言
本标准按照GB/T1.1-2009给出的规则起草
本标准由国家林业局提出.
本标准由全国林业生物质材料标准化技术委员会（SAC/TC416）归口.
技有限公司、厦门格灵生物技术有限公司. 本标准起草单位：华中农业大学、国际竹藤中心、湖北爱茵木塑制品有限责任公司、湖北三木木塑科
本标准主要起草人：熊汉国、余雁、费本华、周曼、宋建军、桂斯斌、谭军、费鹏、陈磊、陈晓玲.
林业生物质原料分析方法淀粉测定
1范围
本标准规定了林业生物质原料中淀粉测定的术语和定义、原理、试剂、溶液配制、仪器设备、操作步骤、结果处理和表述、重复性.
本标准适用于包括林产品（如木材、竹材、藤材等）、林业剩余物（如枝丫、锯末、木屑、梢头、板皮和截头、果壳和果核等采伐剩余物和加工剩余物）等在内的林业生物质原料中淀粉的测定.
2规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的.凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件.凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括的修改单）适用于本文件.
GB/T5009.3-2010食品安全国家标准食品中水分的测定GB/T6682一2008分析实验室用水规格和试验方法GB/T30366-2013生物质术语
3术语和定义
GB/T30366-2013中的某些术语和定义. GB/T30366一2013界定的以及下列术语和定义适用于本文件.为了便于使用，以下重复列出了
3.1
林业生物质forestry biomass
林业生产和加工过程中产生的生物质.主要包括林产品（如木材、竹材、藤材等）、林业剩余物（如枝Y、锯末、木局、梢头、板皮和截头、果壳和果核等采伐剩余物和加工剩余物、造纸废弃物以及废弃木材）、 能源林等.
[GB/T30366-2013 定义2.1.3]
4原理
将林业生物质中的干基淀粉在α-淀粉酶作用下水解成小分子糖，经盐酸水解成具有还原性质的单糖，通过还原糖的含量可以换算出淀粉含量，因此可对淀粉进行定量分析.
5试剂
5.1除特殊规定试剂外，试剂为分析纯.5.2碘（1）.5.3碘化钾（K1）5.4x-淀粉酶：活力单位3000~5000. 5.5无水乙醇（CHOH）.
GB/T 35811-2018
5.6甲苯（CH）.5.8盐酸（HCI).5.9氢氧化钠（NaOH）.5.10二甲基亚矾（DMSO）. 5.11水：应符合GB/T6682-2008中三级水的要求.
5.7三氯甲烷（CHCL）.
6溶液配制
或三氯甲烷，防止长霉.6.2碘溶液：称取3.6g碘化钾溶于20mL水中，加人1.3g碘，溶解后加水稀释至100ml.6.3酚酞：称取1g酚酸，溶解于60mL浓度为95%的乙醇中，加蒸馏水至100mL.6.41mg/mL葡萄糖标准溶液：准确称取0.1g在100℃干燥至恒重的无水葡萄糖，加入少量水溶解 后移人100mL容量瓶中，加人0.5mL盐酸（防止微生物生长），用水稀释至100mL.6.595%乙醇：取95mL无水乙醇，加水定容至100mL混匀.6.66mol/L盐酸：取12mol/L盐酸100mL加水稀释至200mL.6.73，5-二硝基水杨酸溶液：称取6.5g3.5-二硝基水杨酸溶于少量水中，移入1000mL容量瓶中，加6.82mol/L氢氧化钠溶液：称取8.00g氢氧化钠，加水溶解并定容至100ml. 人2mol/L氢氧化钠溶液325mL，再加人45g丙醇，摇匀，冷却后定容.
7仪器设备
7.1植物粉碎机.7.2磁力搅拌机.7.3真空泵.7.5天平：感量分别为0.01g和0.0001g- 7.4旋转蒸发器：自带有标准磨口接口的梨形或圆底烧瓶.7.6锥形瓶：容量为250mL：玻璃棒.7.7容量瓶：容量分别为50mL100mL、250mL和1000mL.7.8抽滤装置：由玻璃砂芯漏斗、吸滤瓶和滤纸组成，用水泵或真空泵抽滤.7.10回流冷凝装置：能与250mL圆底烧瓶瓶口相匹配的. 7.9恒温水浴锅：能加热至100℃.7.11带塞比色管：带有五毫升刻度的10ml.7.12圆底烧瓶：容量为250mL.7.13紫外-可见光分光光度计.
8操作步骤
8.1制作标准曲线
8.1.1定容：在8支10mL的具塞试管中，分别加人1mg/mL葡萄糖标准溶液（6.4）0mL、1mL、1.5mL、2mL、2.5mL、3mL、3.5mL、4mL.按照相应比例用水（5.11）进行定容稀释，得到一组浓度分 别为 0 mg/mL 0. 1 mg/mL 0. 15 mg/mL 0. 2 mg/mL 0.25 mg/mL 0. 3 mg/mL 0.35 mg/mL、2
0.4 mg/mL的葡萄糖系列标准液.然后，取0mg/mL0.1 mg/mL、0.15 mg/mL0.2mg/mL0.25 mg/mL、（7.11）中，各加人3，5-二硝基水杨酸溶液2mL，置沸水浴中5min，然后以流水迅速冷却，加蒸馏水定容至5mL，摇匀.以0mol管作参比，在520nm出测定其吸光度值，并记录.
8.1.2绘制标准曲线.
8.2样品处理
8.2.1取待测样品，用植物粉碎机（7.1）粉碎至全部通过40目孔筛，充分混合，保存备用.8.2.2样品水分含量的测定按GB/T5009.3-2010执行.8.2.3称取试样（8.2.1）2g~5g（m，精确至0.01g）加人到装有25mL乙醇（5.5）的试管中，放置24h， 置于抽滤机上抽滤除去可溶性糖类，将残留物移入250mL锥形瓶（7.6）内，并用50mL水清洗滤纸及漏斗，洗液并人烧瓶内.8.2.4向烧瓶内加入2mL二甲基亚（5.10），用磁力搅拌机（7.2）摇匀后在沸水浴加热15min，使淀8.2.5将棚化的试样放置冷却至60℃以下后，加人20mL淀粉酶溶液（6.1），在恒湿水浴锅（7.9）中 粉糊化（55±1）℃C保湿水解40min，并用玻璃棒搅拌.8.2.6取适量酶解液（8.2.5）滴加1滴碘液（6.2），若不显蓝色说明酶解完成，可进行下一步操作，若显蓝色，再加人20mLa-淀粉酶溶液并继续水解，直至加碘不显蓝色为止.20mL的初滤液后待用.（7.10）在沸水浴95C~100C中回流40min.冷却后滴加1滴酚酞指示剂（6.3），用氢氧化钠（6.8）滴至粉红色，溶液转人50mL容量瓶中，洗涤锥形瓶，定容后摇匀备用.
8.3样品测定
取已经制备好的样液1mL（8.2.8）置于干燥的10mL比色管中，加人2mL3，5-二硝基水杨酸（6.7）溶液，置沸水浴中5min，显色，然后以流水迅速冷却，加水定容至5mL，摇匀.用紫外-可见光分光光度计在520nm处测定其吸光度值（若吸光值不在规定范围内，需在8.2.8定容后容量瓶取出部分滤液常温旋蒸浓缩），由标准曲线查出样品中还原糖含量，并计算出淀粉含量.
9结果处理和表述
9.1试样中淀粉的干基含量（X）以质量分数表示，按式（1）计算：
式中：
X试样中淀粉的干基含量，%；m一从标准曲线上读得的还原糖（以葡萄糖计）质量，单位为毫克（mg）：m.-试样质量，单位为克（g）； m-试剂空白相当于还原糖（以葡萄糖计）质量，单位为毫克（mg）；@试样水分含量，%：0.9-还原糖（以葡萄糖计）换算成淀粉的换算系数.
