中华人民共和国国家标准
GB/T35946-2018
Determination of thimerosal in eye cosmetics-Highperformance liquid chromatography
中国国家标准化管理委员会 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局 发布
前言
本标准按照GB/T1.1-2009给出的规则起草.
本标准由中国轻工业联合会提出.
本标准由全国香料香精化妆品标准化技术委员会（SAC/TC257）归口.
本标准起草单位：江苏省产品质量监督检验研究院（国家化妆品质量监督检验中心）、上海市日用化学工业研究所（国家香料香精化妆品质量监督检验中心）、广东华鑫检测技术有限公司、苏州世谱检测技术有限公司、完美（中国）有限公司、欧诗漫生物股份有限公司、广州质量监督检测研究院、江苏省食品药品监督检验研究院.
张征、康薇、武中平、袁利文、方萍、刘园、王小丹. 本标准主要起草人：卢剑、车文军、沈敏、李晓敏、代丹、廖华勇、寻知庆、杨洋、张丽华、李海、杨安全、
眼部化妆品中硫柳汞含量的测定 高效液相色谱法
1范围
本标准规定了眼部化妆品中硫柳汞含量的高效液相色谱（HPLC）测定方法的试验方法、结果计算、回收率与精密度、允许差等内容.
测定. 本标准适用于卸妆液、眼影、眼霜、睫毛膏、眼线液、眼线膏、眉笔等眼部化妆品中硫柳汞含量的
本标准的方法检出限和定量限：卸妆液的检出限为1mg/kg，眼影、眼霜、眼线液等检出限为2mg/kg.卸妆液的定量限为3mg/kg.眼影、眼霜、眼线液等定量限为6mg/kg-
2规范性引用文件
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GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法
3试验方法
3.1原理
样品经甲醇溶液超声提取、离心后，上清液经固相萃取小柱净化，用高效液相色谱法测定和确证，外标法定量.
3.2试剂与材料
除非另有说明，试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的一级水.
3.2.1甲醇：色谱纯，3.2.2甲酸：色谱级.3.2.3乙睛：色谱纯. 3.2.4乙酸铵.3.2.52%甲酸甲醇溶液：准确移取2ml甲酸于100mL容量瓶中，用甲醇稀释并定容至刻度，混匀后备用.3.2.610%甲酸甲醇溶液：准确移取10mL甲酸于100mL容量瓶中，用甲醇稀释并定容至刻度，混匀 后备用.3.2.70.05mol/L乙酸铵溶液：准确称取乙酸铵3.85g，置1000ml容量瓶中，加水溶解并定容至刻度，混匀过滤后备用.备用.3.2.9固相萃取柱：NH：500mg，6mL固相萃取柱上填充混合型强阳离子交换填料（PXC）150mg]
GB/T 35946-2018
或相当者，使用前依次用5ml甲醇、10mL10%甲酸甲醇溶液、10mL甲醇活化.甲酸甲醇溶液、6mL甲醇活化.3.2.11微孔滤膜：0.22μm，有机相.3.2.12硫柳汞标准样品：纯度不小于97.0%，其中文名称、英文名称、INC1名称、CAS登录号、分子式、 相对分子质量及结构式参见附录A中的表A.1.3.2.13硫柳汞标准储备溶液：1000mg/L.精密称取硫柳汞标准品（3.2.12)10mg（精确到0.1mg）置10 mL容量瓶中，加甲醇（3.2.1）使溶解并定容至刻度，摇匀，即得质量浓度为1000mg/L的硫柳汞标准储备溶液，冷藏避光保存，有效期为一个月.3.2.14中间浓度硫柳汞标准储备溶液：50mg/L.精密量取硫柳汞标准储备溶液（3.2.13）0.5ml，置10mL容量瓶中，加10%甲酸甲醇溶液（3.2.6）定容至刻度，摇匀，即得质量浓度为50mg/L的中间浓 度硫柳汞标准储备溶液，临用前现配.3.2.15硫柳汞标准工作溶液：分别精密量取一定体积的中间浓度硫柳汞标准储备溶液（3.2.14），以10 %甲酸甲醇溶液(3. 2.6)配制成0.O mg/L、0 5mg/L、1.0 mg/L、2.0 mg/1、5.0 mg/L.、10 mg/L、20mg/L50mg/L不同浓度的硫柳汞标准工作溶液，临用前现配.
3.3仪器和设备
3.3.1高效液相色谱仅（二极管阵列检测器）.3.3.2分析天平：感量0.0001g3.3.4固相萃取装置. 3.3.3超声波清洗仪.3.3.5涡旋混合器.3.3.6离心机.
3.4试样制备
3.4.1提取
3.4.1.1眼部卸妆液
摇匀样品，准确称取试样0.5g，加人3mL甲醇，涡旋分散2min.加入甲醇定容至5mL，待净化.
3.4.1.2眼影、眼霜、睫毛膏、眼部凝胶、眼线液、眼线膏、眉笔等
称取样品约0.5g（精确至0.0001g），加入10.0mL50%甲醇溶液（3.2.8），充分振荡1min（较粘样品可适当超声辅助溶解），6000r/min下离心5min，取5mL上清液待净化.
3.4.2净化
3.4.2.1眼部卸妆液
2%甲酸甲醇（3.2.5）洗脱，收集流出液，并用2%甲酸甲醇定容至3mL，混匀，过微孔滤膜（3.2.11），供 将3.4.1.1中的提取液转移至固相萃取柱（3.2.9）.用5m1甲醇（3.2.1）淋洗，弃去流出液，用3mLHPLC分析.
3.4.2.2眼霜、眼线液、眼线膏、睫毛膏、眼部凝胶、眉笔、眼影等
2 将3.4.1.2中的提取液转移至固相萃取柱（3.2.10），用3mL甲醇（3.2.1）淋洗，弃去流出液，用3mL
10%甲酸甲醇（3.2.6）洗脱，收集流出液，并用10%甲酸甲醇定容至3mL，混匀，过微孔滤膜（3.2.11），供HPLC分析.
3.5高效液相色谱法测定
3.5.1液相色谱参考条件
液相色谱参考条件如下：
a）色谱柱：C柱，250mm×4.6mm（id.），5μm，或相当者； b）流动相：0.05mol/L乙酸铵（3.2.7）：甲醇=60：40（体积比）；c）柱温：35℃；d）进样量：20gl;）检测波长：240nm. e）流速：1.0mL/min:
3.5.2标准工作曲线的绘制
取硫柳汞标准工作溶液（3.2.15）进行HPLC测定，以浓度为横坐标，对应的峰面积为纵坐标，作出标准曲线，求得标准曲线回归方程.
3.5.3测定步骤
样品待测液中硫柳汞的响应值应在标准曲线的线性范围内，超过线性范围则应稀释后再进样测定.硫柳汞标准样品色谱图参见附录B中的图B.1.
3.5.4空白试验
除不加试样外，均按上述测定条件和步骤进行.
4结果计算
样品中硫柳汞（以Hg计）含量按式（1）计算，计算结果保留小数点后两位.
(1)
式中：
X.一样品中硫柳汞质量含量（以Hg计），%；C.一测试液中硫柳汞的浓度，单位为毫克每升（mg/L）；V定容体积，单位为毫升（mL）：K-稀释倍数； f--硫柳汞折算为汞的系数0.4955；m一样品质量，单位为克（g）.
5回收率与精密度
在添加浓度35mg/kg~140mg/kg范围内，回收率在90%~110%之间，相对标准偏差小于5%.
