BJS
食品补充检验方法
BJS 202504
食品中酚丁、双丙酚丁、双酚沙丁、 双酚沙丁醋酸酯和酚丁双环丙甲酸 酯的测定
国家市场监督管理总局 发布
双酚沙丁醋酸酯和酚丁双环丙甲酸 食品中酚丁、双丙酚丁、双酚沙丁、 酯的测定
1范围
本方法规定了食品中酚丁、双丙酚丁、双酚沙丁、双酚沙丁醋酸酯和酚丁双环丙甲酸酯的高效液相色谱-串联质谱测定方法.
双酚沙丁醋酸酯和酚丁双环丙甲酸酯的测定. 本方法适用于糖果、果冻、蜜饯、果蔬汁饮料、固体饮料、饼干、代用茶中酚丁、双丙酚丁、双酚沙丁、
2原理
试样经0.1%甲酸-20%水-甲醇溶液提取定容，采用高效液相色谱-申联质谱仪检测，外标法定量.
3试剂和材料
除非另有说明，本方法所用试剂均为色谱纯，水为GB/T6682规定的一级水.
3.1试剂
3.1.1乙晴(CHN).3.1.2甲醇（CHO）.3.1.3甲酸（CHO）.3.1.4乙酸铵(CHON）.
3.2试剂配制
3.2.10.1%甲酸-水溶液：吸取甲酸（3.1.3）1mL，用水稀释并定容至1000mL，混匀备用.3.2.20.1%甲酸-甲醇溶液：吸取甲酸（3.1.3）1mL，用甲醇（3.1.2）稀释并定容至1000mL，混匀备用.3.2.30.1%甲酸-20%水-甲醇溶液：量取甲醇（3.1.2）800mL，加入甲酸（3.1.3）1mL，用水稀释并定容 至1000mL，混匀备用.3.2.4乙酸铵-甲酸-水溶液（5mmol/L)：称取乙酸铵（3.1.4)0.385g，用0.1%甲酸-水溶液（3.2.1）溶解并定容至1000mL，混匀备用.
3.3标准品
酚丁、双酚沙丁、双酚沙丁醋酸酯、双丙酚丁和酚丁双环丙甲酸酯标准品，纯度≥98%或经国家认证并授予标准物质证书的标准品，见附录A.
3.4标准溶液配制
3.4.1标准储备溶液（1mg/mL）：称取标准品各10mg（精确至0.0001g）.加人适量甲醇（3.1.2）充分
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溶解后分别转移至10mL容量瓶中，用甲醇（3.1.2）定容至刻度，配制成浓度均为1mg/mL的标准储备 溶液.一18C及以下密封避光保存，有效期3个月.
3.4.2混合标准中间溶液（10μg/mL）：分别准确移取各标准储备液1.0mL于100mL容量瓶中，用甲醇（3.1.2）稀释并定容，配制成浓度为10pg/mL的混合标准中间溶液.0℃C～4C密封避光保存，有效期1个月.
3.4.3标准系列工作溶液：分别准确吸取混合标准中间溶液适量，用空白基质提取液（5.2.3）稀释，配制成浓度分别为2.0ng/mL、5.0ng/mL、10ng/mL、20ng/mL和 50ng/mL的基质标准系列工作溶液，现配现用.
3.5材料
3.5.1有机相微孔滤膜：0.22um，尼龙或聚四氟乙烯材质.
4仪器和设备
4.1高效液相色谱-申联质谱仪，配电喷雾离子源（ESI）.4.2分析天平：感量分别为0.001g和0.0001g.4.3超声波振荡仪，4.5离心机：转速不低于4000r/min. 4.4恒温水浴装置.4.6涡旋混合器.4.7高速粉碎机.
5分析步骤
5.1试样制备和保存
取100g试样（当试样低于100g时取全部试样），果蔬汁饮料、固体饮料充分混匀，饼干、代用茶、糖果充分粉碎混匀，蜜战样品去核剪碎至2mm以下，果冻样品充分搅碎至浆状.制备好的试样于0C~4℃C密封保存.
5.2试样处理
5.2.1蜜饯、果蔬汁饮料、固体饮料、饼干、代用茶
称取1.0g（精确至0.001g）样品于50mL具塞离心管中，加人40mL0.1%甲酸-20%水-甲醇溶液（3.2.3），超声提取15min，冷却至室温，4000r/min离心5min，上清液全部转移至50mL容量瓶中，用0.1%甲酸-20%水-甲醇溶液（3.2.3）定容至刻度并摇匀，提取液经微孔滤膜过滤，待测.
5.2.2糖果、果冻
称取1.0g（精确至0.001g）样品于50mL具塞离心管中，加人8mL0.1%甲酸-水溶液（3.2.1），70℃~80C水浴至样品溶解（水溶过程中注意振摇），冷却至室温，加人32mL0.1%甲酸-甲醇溶液 (3.2.2），超声提取15min，冷却至室温，4000r/min离心5min，上清液全部转移至50mL容量瓶中，用0.1%甲酸-20%水-甲醇溶液（3.2.3）定容至刻度并摇匀，提取液经微孔滤膜过滤，待测.
5.2.3空白基质提取液
选取空白基质样品，按照5.2.1或5.2.2操作步骤进行空白基质提取液的制备.
5.3仪器参考条件
5.3.1色谱条件如下.
a）色谱柱：高强度硅胶额粒三键键合C色谱柱（2.1mm×100mm，1.8μm），或性能相当者. b）流动相：A为5mmol/L.乙酸铵-甲酸-水溶液（3.2.4），B为乙睛（3.1.1)，流动相梯度洗脱程序见表1.
表1流动相梯度洗脱程序
时间/min 流动相A/% 流动相B/%0 80 201.5 80 206 5 5 959 01 9 5 80 95 2011 80 20
c）流速；0.3mL/min. d）柱温：40℃.e）进样量：1pL.
5.3.2质谱条件如下.
a）离子源：电喷雾离子源（ESI）.b）扫描方式：正离子扫描. 监测方式：多反应监测模式（MRM）.c） d）离子喷雾电压（IS）：5000V.e）雾化气压力（GS1）；345kPag）气帘气（CUR）：241 kPa. 辅助气压力（GS2）：310kPa.h）碰撞气（CAD）：62kPa.离子源温度（TEM）;550°C.j) 其他质谱参数见表2.
表2待测物离子对、碰撞能量和去簇电压参考值
化合物 离子对（m/=） 磁撞能量/eV 去族电压/V318 1/224 1 * 21酚T 318 1/196 .1 45 83334 1/240 1 16 75334 1/212.1 42 75双酚沙丁酯酸酯 418 1/240 1 25 92418 1/282.1 14 92
表2待测物离子对、碰撞能量和去簇电压参考值（续）
化合物 离子对（m/z） 碰撞能量/eV 去额电压/V430.2/224 1* 32 111双丙酸丁 430 2/280 1 17 II1酯丁双环丙甲酸酯 454.2/224 1° 26 114454 2/292 1 19 114定量离子对.
5.4标准曲线的制作
列工作溶液中各化合物的质量浓度为横坐标，以对应化合物色谱峰的峰面积为纵坐标，绘制标准曲线. 将标准系列工作溶液（3.4.3）分别注人高效液相色谱-串联质谱仪中，测定相应的峰面积，以标准系标准溶液的色谱图见附录B.
5.5试样溶液的测定
5.5.1定性测定
按仪器参考条件测定试样溶液和标准系列工作溶液，记录试样和标准系列工作溶液中各化合物的作溶液中的保留时间相对偏差不大于2.5%，且定量离子与定性离子的相对离子丰度与浓度相当标准溶 色谱保留时间和定量离子与定性离子的相对离子丰度.当试样中化合物色谱峰保留时间与标准系列工液中相对离子丰度（k）偏差不超过表3规定的范围，则可确定试样中检出相应化合物.
表3相对离子丰度的最大允许偏差
相对离子丰度/% 最大允许偏差/% >50 ±20 20<≤50 ±25 10<≤20 ±30 ≤10 ±50 5.5.2定量测定 将试样溶液按仪器参考条件进行测定，得到相应的样品溶液的色谱峰面积.根据标准曲线得到待测物的浓度.试样溶液中待测物的响应值均应在标准曲线的线性范围之内，超出线性范围时应根据目标物含量用空白基质提取液（5.2.3）进行适当倍数稀释后再进行分析. 5.6空白试验 除不加试样外，均按5.2步骤操作. 6结果计算 试样中各待测组分的含量按式（1）计算： 式中： X 试样中各待测组分的含量，单位为毫克每千克（mg/kg）：
