中华人民共和国国家标准
GB 5009.24-2026
食品安全国家标准
食品中黄曲霉毒素M族的测定
中华人民共和国国家卫生健康委员会 国家市场监督管理总局 发布
前言
本标准代替GB5009.24-2016《食品安全国家标准食品中黄曲霉毒素M族的测定》.本标准与GB5009.24-2016相比，主要变化如下：修改了第一法液相色谱法和第二法液相色谱-质谱/质谱法的前处理方法： 调整了第一法和第二法的顺序：修改了第一法名称为液相色谱法：修改了第二法名称为液相色谱-质谱/质谐法；修改了第三法名称为酶联免疫吸附法.
食品安全国家标准
食品中黄曲霉毒素M族的测定
1范围
方法.本标准第一法液相色谱法和第二法液相色谱-质谱/质谱法适用于乳及乳制品、特殊膳食用食品中AFT M 和 AFT M;的测定.
本标准规定了食品中黄曲霉毒素M和黄曲霉毒素M（以下简称AFTM和AFTM）的测定
本标准第三法酶联免疫吸附法适用于乳及乳制品、特殊膳食用食品中AFTM的筛查测定.
第一法液相色谱法
2原理
试样经甲醇或甲醇-水提取，免疫亲和柱净化，液相色谱-荧光检测器检测，外标法定量，
3试剂和材料
除非另有说明，本方法所用试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的一级水.
3.1试剂
3.1.1乙晴（CHCN）：色谱纯.3.1.2乙晴（CHCN）. 3.1.3丙三醇（CH O）.3.1.4甲醇（CHOH）.3.1.5氯化钠（NaCl)3.1.6磷酸氢二钠（NaHPO）.3.1.7磷酸二氢钾（KHPO）. 3.1.8氯化钾（KCI）.3.1.9盐酸（HCI).3.1.10石油醚（C H）：沸程为30°℃~60C.3.1.11吐温-20（CHO）
3.2试剂配制
3.2.1磷酸盐缓冲溶液（以下简称PBS）：称取8.Og氯化钠、1.2g磷酸氢二钠、0.2g磷酸二氢钾、0.2g氯化钾，用980mL水溶解后，盐酸调pH至7.2~7.6，再加水至1000mL，混匀.3.2.2乙晴-水（1585）：量取85mL水和15mL乙，混匀. 3.2.3甲醇-水（5050）：量取500mL水和500mL甲醇，混匀.
3.2.410%丙三醇甲醇溶液：称取1.0g丙三醇，加甲醇稀释至10mL，混匀.3.2.5含0.5%吐温-20 的磷酸盐缓冲液（PBS-T)：称取5.0g吐温-20 加入PBS稀释至1 000 mL，混匀.
3.3标准品
3.3.1AFTM（C：H：O;CAS：6795-23-9）纯度≥98%的标准品或其溶液.3.3.2AFTM（CHOCAS：6885-57-0)：纯度≥98%的标准品或其溶液.
3.4标准溶液配制
和废弃物存放装置.在整个试验过程中，操作者应按照接触剧毒物的要求采取相应的保护措施. 警示：整个分析操作过程应在指定区域内进行，该区域应避光（直射阳光）、具备相对独立的操作台
中，加乙晴溶解，转移至1000mL容量瓶中，以乙精定容至刻度，混匀，用分光光度计进行浓度校准（参度避光保存，有效期12个月. 见附录A），得到浓度为10.0mg/L的标准储备溶液.将溶液转移至棕色试剂瓶中，于一18C及以下温
3.4.2混合标准中间溶液（1.00mg/L)：分别吸取1.00mLAFT M和AFT M 标准储备溶液于同一10.0mL容量瓶中.加乙晴稀释至刻度，混匀，得到1.00mg/L的混合标准中间溶液.将溶液转移至棕色试剂瓶中，于一18℃及以下温度避光保存，有效期12个月.
3.4.3混合标准工作溶液（100μg/L)：准确吸取1.00mL混合标准中间溶液于10.0mL容量瓶中，加 乙精稀释至刻度，混匀，得到100pg/L的混合标准工作溶液.将溶液转移至棕色试剂瓶中.2℃~6℃避光保存，有效期3个月，
3.4.4标准系列工作溶液：准确移取混合标准工作溶液适量，用乙晴-水（1585）配制成AFTM和AFT M的质量浓度均分别为0.100μg/L.、0.200μg/L、0 500μg/L、1.00pg/L、5.00μg/L的标准系列工作溶液.临用现配.
3.5.1玻璃纤维滤纸.3.5.3免疫亲和柱：柱容量≥100ng，AFTM和AFTM的柱回收率≥85%. 3.5.2微孔滤膜：0.45pm，有机系.
4仪器和设备
4.2电子天平：感量0.01g、0.001g和 0.1 mg. 4.1液相色谱仪：配有荧光检测器.4.3水浴锅：温控50℃土2℃.4.4涡旋混合器.4.5冷冻离心机；转速不小于6000r/min.4.6固相萃取装置（带真空泵）. 4.7氮吹仪.4.8高速粉碎机.4.9高速匀浆机.
5分析步骤
5.1试样制备与保存
5.1.1试样制备
0.5kg，其中，固体样品用高速粉碎机粉碎，半周体样品用组织捣碎机捣碎，液体样品用匀浆机匀浆，注1：对于高油脂含量颗粒样品、柔韧性样品、高黏度样品、高糖样品等特殊样品可以采取冷冻等情施进行制样. 注2：对于碳酸饮料或酒类等可采取超声、搅择或抽真空等措施脱气后混匀.注3：根据检验目的可按实际情况取样制备.
检测用的样品量应大于1kg；当样品量不足1kg时，至少取同一批次的3个包装；缩分后取不低于
5.1.2试样保存
于2C~6℃或一18℃及以下避光保存. 制备后混合均匀的样品均分至约100g的多个包装，储存于活净的容器内，密封后根据样品性质置
5.2试样提取
5.2.1液体试样（除奶油外）、半固体试样
称取试样4g（精确到0.01g）于50mL离心管中，加入10mL分析纯甲醇，涡旋或振荡3min，将混匀后的样品置于2℃~6C冰箱中1h~2h，待样品温度稳定，再置于2℃~6℃、6000r/min或更高转速下离心5min，过滤以除去表面脂质层，再将全部上清液转移至50mL离心管中，加PBS-T稀释 至50mL（如有浑浊，用玻璃纤维滤纸过滤或高速离心后再上柱）混匀，待过柱净化.
5.2.2固体试样（除奶油外）
称取试样1g（精确到0.001g）于50mL离心管中，加人4mL水，于50℃水浴中温育10min，待溶解后，涡旋混匀，冷却至室温后，加人10ml.甲醇，涡旋或报荡3min.将混匀后的样品置于2C~6℃C冰表面脂质层，再将全部上清液转移至50mL离心管中，加PBS-T稀释至50mL（如有浑浊，用玻璃纤维滤纸过滤或高速离心后再上柱），混匀，待过柱净化.
5.2.3奶油
醇-水（5050)，涡旋或振荡30min.加人0.3g氯化钠，充分晃动溶解，将混匀后的样品置于2℃～6C冰油醚，加PBS-T稀释至50mL（如有浑浊，用玻璃纤维滤纸过滤或高速离心后再上柱），混匀，待过柱净化.
5.3试样净化
待免疫亲和柱恢复至室温，原有液体流尽后，以约每秒1滴的流速将待净化的稀释液全部通过免疫亲和柱.稀释液流尽后依次用10mLPBS-T、10ml.水淋洗免疫亲和柱.待水滴完抽干免疫亲和柱.加入1mL甲醇洗脱，控制下滴流速为1mL/min~2mL/min，待甲醇滴完，再加人1mL甲醇重复洗脱一次，抽干，收集全部洗脱液.洗脱液中加人10%丙三醇甲醇溶液50gL，50℃下氮气吹干，加入0.
