中华人民共和国国家标准
GB 5009.96-2026
食品安全国家标准
食品中赭曲霉毒素A的测定
中华人民共和国国家卫生健康委员会 国家市场监督管理总局 发布
前言
本标准代替GB5009.96-2016《食品安全国家标准食品中赭曲霉毒素A的测定》.本标准与GB5009.96-2016相比，主要变化如下：
一剩除了薄层色谱法： 增加了标准的适用范围：将原标准第一法和第二法合并为“第一法液相色谱法”：修改了原标准第三法为"第二法液相色谱-质谱/质谱法”，并修改了前处理条件及定量方法；一增加了曲霉毒素A标准溶液的校准方法.
食品安全国家标准
食品中赭曲霉毒素A的测定
1范围
本标准规定了食品中赭曲霉毒素A的测定方法.本标准第一法液相色谱法适用于食品（除婴幼儿辅助食品外）中赭曲霉毒素A的测定.本标准第二法液相色谱-质谱/质谱法适用于食品中赭曲霉毒素A的测定.本标准第三法酶联免疫吸附法适用于谷物及其制品、豆类食品中赭曲霉毒素A的筛查测定.
第一法液相色谱法
2原理
测，外标法定量， 试样经乙晴-水提取，免疫亲和柱或混合型强阴离子交换固相萃取柱净化，液相色谱-荧光检测器检
3试剂和材料
除非另有说明，本方法所用试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的一级水.
3.1试剂
3.1.1甲醇（CHOH）：色谱纯.3.1.2乙睛（CHCN）：色谱纯. 3.1.3乙酸（CHCOOH）：色谱纯.3.1.4甲苯（C.HCH）：光语纯.3.1.5甲醇（CHOH）.3.1.6乙晴（CHCN)3.1.8碳酸氢钠（NaHCO.）. 3.1.7氯化钠（NaCl）.3.1.9磷酸氢二钠（NaHPO ）.3.1.10磷酸二氢钾（KHPO）.3.1.12盐酸（HCI)， 3.1.11氯化钾（KCI）.3.1.13氢氧化钠（NaOH），3.1.14吐温-20（CHO）.
3.2试剂配制
3.2.11%乙酸-甲苯：量取1mL乙酸用甲苯稀释至100mL，混匀.
GB 5009.96-2026
3.2.2磷酸盐缓冲溶液（以下简称PBS溶液）：称取8.00g氯化钠、1.20g磷酸氢二钠、0.20g磷酸二氢钾、0.20g氧化钾，用900mL水溶解，用盐酸调节pH至7~7.5，用水稀释定容至1000mL.3.2.33%碳酸氢钠溶液：称取30g碳酸氢钠，用水溶解并定容至1000mL，混匀.3.2.4氢氧化钠溶液（1mol/L）：称取40g氢氧化钠，用1000mL水溶解并定容，混匀.3.2.50.5%吐温-20-PBS 溶液：称取5g吐温-20，用1000mLPBS溶液溶解，混匀.3.2.680%乙晴-水：量取200mL水加人到800mL乙晴中，混匀 3.2.72%乙酸-甲醇：量取2mL乙酸用甲醇稀释至100mL，混匀.3.2.85%甲酸-乙精：量取5mL甲酸用乙精稀释至100mL，混匀.3.2.91%乙酸溶液：量取10mL乙酸用水稀释至1000mL，混匀.3.2.10乙晴-甲醇（46）：量取400mL色谱纯乙晴加入600mL色谱纯甲醇中，混匀.
3.3标准品
3.3.1曲霉毒素A（CHCINO，CAS号：303-47-9）：纯度99%的标准品或其溶液.
3.4标准溶液配制
3.4.1标准储备液（20μg/mL）：称取1mg（精确至0.01mg）曲霉毒素A.用1%乙酸-甲苯溶解并定容至50mL.将溶液转移至棕色试剂瓶中，用分光光度计进行浓度校准（参见附录A），于一18℃及以下温度避光保存，有效期6个月.3.4.2标准使用液（1.0μg/mL)：准确移取赭曲霉毒素A标准储备液0.5mL于10mL容量瓶中，氮气吹干，加甲醇溶解并定容.于一18℃及以下温度避光保存，有效期3个月.3.4.3标准系列工作液：准确移取赭曲霉毒素A标准使用液适量，用初始流动相配制成质量浓度分别 为 0.5 ng/mL、1 ng/mL、2 ng/mL、10 ng/mL、50 ng/mL的标准系列工作液，2 C~6℃下避光保存，临用现配.
牌9'
3.5.1微孔滤膜：0.45pm，有机系. 3.5.2赭曲霉毒素A免疫亲和柱：柱容量≥100ng.柱回收率≥85%.基苯共聚物；或相当者.
4仅器和设备
4.1电子天平：感量0.01g和0.01mg.4.2液相色谱仪：配荧光检测器.4.3pH计.4.4涡旋振荡器. 4.5高速粉碎机.4.6组织接碎机.4.7匀浆机.4.8离心机：≥6000r/min.4.9固相萃取装置. 4.10氮吹仪.2
5分析步骤
5.1试样制备与保存
5.1.1试样制备
检测用的样品量应大于1kg：当样品量不足1kg时，至少取同一批次的3个包装；缩分后取不低于0.5kg.其中，固体样品用高速粉碎机粉碎，半固体样品用组织搞碎机捣碎，液体样品用匀浆机匀浆.注1：对于高油脂含量额粒样品、柔韧性样品、高轴度样品、高糖样品等特殊样品可以采取冷冻等措施进行制样. 注2：对于碳酸饮料或酒类等，可采取超声、搅拌或抽真空等措施税气后混匀.注3：根据检验目的可按实际情况取样制备.
5.1.2试样保存
制备后混合均匀的试样均分至约100g的多个包装，储存于洁净的容器内，密封后置于2℃～6℃或一18℃及以下温度避光保存.
5.2试样提取
5.2.1酒类、饮料类（除固体饮料外）
称取20g（精确到0.01g）试样于50mL离心管中，加人20mL乙晴、5g氯化钠，涡旋振荡30min.6000r/min离心10min，取上清液备用.
5.2.2水果及其制品、植物油、调味品（除香辛料外）
称取5g（精确到0.01g）试样于50mL离心管中，加人1g氯化钠、5mL水混匀后，加人20mL乙晴提取液，涡旋振荡30min.6 000r/min离心10min，取上清液备用.
5.2.3其他样品
80%乙晴-水溶液，涡旋振荡30min.6000r/min离心10min，取上清液备用. 称取5g（精确到0.01g，固体饮料、坚果及籽类称取2.5g）试样于50mL离心管中，加人20mL的
5.3试样净化
注：根据实际情况，选择其中一种方法净化即可.
5.3.1免疫亲和柱净化
移取4mL上清液置于离心管中，加人0.5%吐湿-20-PBS溶液46mL，混匀，用1mol/L氢氧化钠溶液调节pH至7~7.5.6000r/min离心5min，取全部稀释液，待净化.
待免疫亲和柱恢复至室温，原有液体流尽后，以约每秒1滴的流速将待净化的稀释液全部通过免疫亲和柱.稀释液流尽后依次用10mL的0.5%吐温-20-PBS溶液、10mL的PBS溶液淋洗免疫亲和柱，流速约为每秒1滴，抽干小柱，弃去全部流出液.加人2mL的2%乙酸-甲醇洗脱免疫亲和柱，控制每秒1滴的下滴速度，抽干小柱，收集全部洗脱液至试管中，在50C条件下氮气吹干，加入500uL初始流动相复溶，涡旋振荡30s，滤膜过滤，待检测.
注：使用不同厂商的免疫亲和柱，样品上样、淋洗和洗脱等操作可能略有不同，应按说明书操作.
5.3.2混合型强阴离子交换固相萃取柱净化（仅适用于谷物及其制品）
移取4mL上清液置于15mL离心管中，加人4mL的3%碳酸氢钠溶液，涡旋混合，6000r/min
