B16 ICS 65.020
NY
中华人民共和国农业行业标准 NY/T3081-2017
番茄抗番茄黄化曲叶病毒鉴定技术规程
Ruleforevaluationoftomatoresistancetotomatoyellowleafcurlvirus
2017-06-12发布2017-10-01实施
中华人民共和国农业部发布
NY/T3081-2017
前言
本标准按照GB/T1.1一2009给出的规则起草。
本标准由农业部种植业管理司提出。
本标准由全国蔬菜标准化技术委员会（SAC/TC467）归口。
本标准起草单位：中国农业科学院蔬菜花卉研究所。
本标准主要起草人：谢丙炎、冯兰香、杨宇红、节振川、陈国华、凌键、杨翠荣。
工
NY/T3081-2017
番茄抗番茄黄化曲叶病毒鉴定技术规程
1范围 本标准规定了番茄抗番茄黄化曲叶病毒（tomatoyellowleafcurlvirus）的鉴定方法和评价方法。
本标准适用于番茄（SolanumLycopersicumL.）品种及材料抗番茄黄化曲叶病毒的室内鉴定 及抗性评价。
2规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。
凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文 件。
凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括的修改单）适用于本文件。
GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法 3术语和定义 NY/T1858.7界定的以及下列术语和定义适用于本文件。
3. 1 番茄黄化曲叶病毒tomatoyellowleafcurlvirus，TYLCV 属于双生病毒科（Geminiviridae）菜豆金色花叶病毒属（Begomovirus），病毒粒体为双联体结构，由 两个不完整的二十面体组成，无包膜。
是一种通过烟粉虱和嫁接传播，可严重危害多种双子叶植物的重 要病毒。
3.2 番茄黄化曲叶病tomatoyellowleafcurldisease，TYLCD 由番茄黄化曲叶病毒引起的番茄病毒病害。
病害诊断参见附录A。
注：该病害的主要症状是病叶明显变小、皱缩，脉间变黄、叶缘鲜黄，叶片卷曲呈杯状或盘状，植株严重矮化，顶部形 似菜花状。
4试剂与材料 除非另有说明，本方法所用试剂均为分析纯，水为GB/T6682中规定的三级水。
4.1MS培养基 4.1.1MS液体培养基 称取MS干粉（M519)4.43g，蔗糖30g，加水定容至1000mL，搅拌均匀并溶化后，调节pH为5.8， 于121C高压灭菌30min，4℃下保存备用。
4.1.2MS固体培养基 称取MS干粉（M519)4.43g、蔗糖30g、琼脂粉9g，加水定容至1000mL，搅拌均匀并溶化后，调节 pH为5.8，于121C高压灭菌30min，4℃下保存备用。
4.2YEP培养基 4.2.1YEP液体培养基 称取胰蛋白陈10g、酵母提取物10g、氯化钠5g，加水950mL，用5mol/L氢氧化钠溶液调节pH 为7.0，定容至1000mL，于121C高压灭菌30min，4C下保存备用。
4.2.2YEP固体培养基
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称取胰蛋l陈10g、酵母提取物10g、氯化钠5g、琼脂粉9g，加水950ml，用5mol/1.氢氧化钠溶 液调节pH为7.0，定容至1000mL，于121°C高下火菌30min，4°℃下保存备用。
4.3抗生素母液 4.3.1卡那霉素母液（50mg/mL) 称取250mg卡那霉素，溶人5mL水中后，在超净台内注人5ml.的一次性注射器中，经硝酸纤维 素膜（孔径0.22μm）过滤灭菌，即得50mg/ml.卡那霉素母液。
分装到5个灭菌的2mI.冷冻管里，每 管1mI，置2℃～8C冰箱十保存，可使用1个月；或一20℃长期保存。
4.3.2利福平母液（50mg/mL） 称取250mg利福平于EP管中，先用少量无水乙醇涡旋振荡以溶解，再加水定容至5mL，然后在超 净台内注人5mL的一次性注射器中，经硝酸纤维素膜（孔径0.22μm）过滤除菌，即配成50mg/mL利 福平母液。
分装到5个灭菌的2mL冷冻管电，每管1mL，置一20C可保存3个月。
4.3.3乙酰丁香酮母液（100mmol/L) 称取98.1mg乙酰丁香酮于EP管中，先用少量无水甲醇溶解，再慢慢加水定容至5mI，然后在超 净台内注人5mI.的一次性注射器中，经硝酸纤维素膜（孔径0.22μm）过滤除菌，即配成100mmol/L 乙酰]香酮母液，分装到5个灭菌的2mL冷冻管里，每管1mL。
现用现配，置一20℃保存仅1个月。
4.3.4头孢噻污钠母液（500mg/mL） 称取3g头孢噻污钠先溶于6mI.灭菌水中，再在超净台内用一次性注...
