ICS11.220 B41 GB 中华人民共和国国家标准 GB/T27531-2011 病毒性脑病和视网膜病病原逆转录-聚合 酶链式反应(RT-PCR)检测方法 Protocol of reverse transcription polymerase chain reaction (RT-PCR) for the pathogen of viral encephalopathy and retinopathy 2011-11-21发布 2012-03-01实施 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局 中国国家标准化管理委员会 发布 GB/T27531-2011 前言 本标准按照GB/T1.1一2009给出的规则起草. 本标准由中华人民共和国农业部提出. 本标准由全国动物防疫标准化技术委员会(SAC/TC181)归口， 本标准起草单位：中华人民共和国深圳出人境检验检疫局. 本标准主要起草人：刘荭、卢体康、何俊强、史秀杰、郑晓聪、贾鹏、叶奕优、杨锦舜. I GB/T27531—2011 病毒性脑病和视网膜病病原逆转录-聚合 酶链式反应(RT-PCR)检测方法 1范围 本标准规定了病毒性脑病和视网膜病(viral encephalopathy and retinopathy VER)病原分离和逆 转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测方法. 本标准适用于VER病原的流行病学调查、诊断、检疫和监测. 2规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的.凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文 件.凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括的修改单）适用于本文件. GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法 GB/T18088出人境动物检疫采样 3缩略语 下列缩略语适用于本文件. CPE:细胞病变(cytopathic effect) CTAB:十六烷基三甲基溴化铵(hexadecyl trimethy ammonium bromide) DEPC:焦碳酸乙二酯(diethypyrocarbonate) EB:溴化乙锭(ethidium bromide) EDTA:乙二胺四乙酸(ethylenediaminetetraaceticacid) HEPES:羟乙基呱嗪乙硫磺酸[4-(2-hydroxyerhyl)piperazine-l-erhanesulfonic acid] RNA:核糖核酸(ribonucleic acid) RNasin:核酸酶抑制剂(ribonuclease inhibitor) VER:病毒性脑病和视网膜病(viral encephalopathy and retinopathy.) 4试剂和材料 4.1水：符合GB/T6682中一级水的规格，用DEPC处理以除掉RNA酶. 4.2VERV病毒参考株. 4.3胰酶-EDTA混合消化液（见附录A中A.1). 4.4L-15培养液（见附录A中A.2). 4.5SSN-1细胞系：用L-15培养液25℃培养. 4.6E-11细胞系：用L-15培养液25℃培养. 4.7AMV逆转录酶：20U/μL 一20℃保存，不要反复冻融或温度剧烈变化. 4.8 RNasin:20U/pL 一20℃保存，不要反复冻融或温度剧烈变化. 4.9胰蛋白酶. 1 ...
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