ICS65.020 B16 NY 中华人民共和国农业行业标准 NY/T2310-2013 花生黄曲霉侵染抗性鉴定方法 Evaluation method of peanut resistance to Aspergillus flavus infection 2013-05-20发布 2013-08-01实施 中华人民共和国农业部发布 NY/T2310-2013 花生黄曲霉侵染抗性鉴定方法 1范围 本标准规定了花生黄曲霉侵染抗性鉴定方法. 本标准适用于花生黄曲霉侵染抗性的鉴定. 2规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的.凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文 件.凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括的修改单）适用于本文件. GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法 GB/T19547感官分析方法学量值估计法 3原理 用黄曲霉菌接种待测花生样品，恒温恒湿培养，计算黄曲霉菌侵染接种花生样品的侵染指数，评价 花生黄曲霉侵染抗性. 4试剂与材料 除非另有说明，均使用分析纯试剂和GB/T6682规定的一级水. 4.1氯化汞(HgCl2):化学纯. 4.2硝酸钠(NaNO3):化学纯. 4.3磷酸氢二钾(K2HPO):化学纯. 4.4七水合硫酸镁(MgSO47H2O):化学纯. 4.5氯化钾(KC1):化学纯. 4.6硫酸亚铁(FeSO47H2O):化学纯. 4.7蔗糖：化学纯. 4.8琼脂：水分<22%，灰分<3%. 4.9察氏培养基：准确称取硝酸钠3.00g 磷酸氢二钾1.00g 七水合硫酸镁0.50g 氯化钾0.50g 七 水合硫酸亚铁0.01g 蔗糖30.00g 琼脂20.00g 加水定容至1000mL.加热溶解，锥形瓶50mL分装 后121℃灭菌20min. 4.10HgCl2溶液：e(HgC12)=0.2% 准确称取0.2g氯化汞，加水定容至100mL.现配现用. 4.11无菌水：121℃灭菌20min 冷却待用. 4.12吐温水溶液：999mL水中加入1mL吐温-20，混匀后121℃高压灭菌20min 冷却待用. 4.13黄曲霉菌株（菌株编号：AF2202). 5仪器设备 5.1血球计数板. 5.2高压灭菌锅. 5.3生物安全柜. 1 NY/T2310-2013 5.4恒温恒湿培养箱. 5.5离心机. 5.6显微镜. 5.7旋涡混合器. 5.8培养皿：内径20cm. 5.9烧杯：100mL. 5.10锥形瓶：150mL. 6试样制备 取无损健康的花生英果，手工小心剥取籽仁，挑选种皮完好、无病虫斑的饱满籽粒50粒. 7黄曲霉菌孢子悬浮液配制 生物安全柜中无菌取出黄曲霉菌株(4.13)，接种于察氏培养基(4.9)，30℃培养8d~10d 用吐温 水溶液(4.12)洗脱分生孢子，用血球计数板在显微镜下计算孢子浓度，调整孢子浓度到5×10s个/L 的孢子悬浮液，备用. 8接种与培养 8.1表面灭菌 将花生籽粒置于装有HgC12溶液(4.10)的烧杯中浸泡10min 取出用无菌水漂洗两次，保持籽粒 种皮完整. 8.2接种 将灭菌后的花生籽粒移入干净烧杯中，加入5X105个/mL的孢子悬浮液1mL 轻摇烧杯使菌液与 籽粒充分均匀接触，然后用无菌镊子轻轻取出均匀地分散排列于3个带灭菌滤纸的培养皿(5.8)内. 8.3培养 于恒温恒湿培养箱中30℃、湿度90%培养6d. 9空白对照 设置对照组，除不接种黄曲霉外，其他操作与接种操作相同. 10侵染指数计算 10.1花生侵染分级 根据GB/T19547的要求分组采用肉眼观察花...
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