中华人民共和国国家标准
GB 5009.120-2025
食品安全国家标准
食品中丙酸及其盐的测定
中华人民共和国国家卫生健康委员会 国家市场监督管理总局 发布
前言
本标准与GB5009.120-2016相比，主要变化如下：扩大了方法的适用范围； 一标准名称修改为“食品安全国家标准食品中丙酸及其盐的测定”；删除了面包样品制备中烘干步骤；一增加了“第一法高效液相色谱法”中浸提法的净化步骤及计算公式：补充了浸提法的检出限和定量限：一修改了气相色谱法标准曲线的制作过程.
食品安全国家标准
食品中丙酸及其盐的测定
1范围
本标准规定了食品中丙酸及其盐的液相色诺和气相色谱测定方法.本标准适用于粮食和粮食制品、培烤食品、油炸食品、肉制品、调味品、豆类制品、罐头中丙酸及其盐的测定.
第一法高效液相色谱法
2原理
试样中的丙酸盐通过酸化转化为丙酸.经水蒸气蒸馏，收集蒸馏液并调pH后定容，用高效液相色谱仪测定：或用超声波提取后，提取液调pH后定容，经固相萃取柱净化，用高效液相色谱仪测定，根据 色谱峰的保留时间定性，外标法定量检测丙酸的含量.样品中的丙酸及其盐以丙酸计.
3试剂和材料
除非另有说明，本方法所用试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的一级水.
3.1试剂
3.1.1磷酸（HPO）.3.1.2磷酸氢二铵[（NH）HPO]. 3.1.3硅油.3.1.4甲醇（CHOH）：色谱纯.
3.2试剂配制
3.2.1磷酸溶液（1mol/L）：在50mL水中加人53.5mL磷酸，混匀后，加水定容至1000ml. 3.2.2磷酸氢二铵溶液（1.5g/L）：称取磷酸氢二铵1.5g，加水溶解并定容至1000mL.3.2.3甲醇-水溶液（1090）：将甲醇和水按10：90的体积比混合均匀.3.2.4甲醇-水溶液（4060）：将甲醇和水按40：60的体积比混合均匀.
3.3标准品
丙酸标准品（CHO），CAS号：79-09-4，纯度≥99.0%，或经国家认证并授予标准物质证书的标准品.
3.4标准溶液的配制
3.4.1丙酸标准储备液（10.0mg/mL)：称取250.0mg（精确至0.1mg）丙酸标准品，用水溶解并转移至
GB 5009.120-2025
25mL容量瓶中，用水定容至刻度，4C冰箱中保存，有效期为6个月. 3.4.2丙酸标准中间液（1.00mg/mL）：准确吸取5.00mL标准储备液于50mL容量瓶中，用水稀释至刻度，4C冰箱中保存，有效期为3个月.
3.5材料
3.5.1固相萃取柱：500mg/6mL，聚苯乙烯/二乙烯苯亲水亲脂平衡型填料或等效柱.3.5.2水相微孔滤膜和有机微孔滤膜：0.45μm.
4仅器和设备
4.1高效液相色谱仪：配有紫外检测器或二极管阵列检测器.4.2天平：感量0.0001g和0 01 g.4.3超声波发生器. 4.4离心机：转速不低于4000r/min.4.5组织接碎机.4.6水蒸气蒸馏装置：500mL.4.8固相萃取装置. 4.7pH计：精度为0.01.
5分析步骤
5.1样品前处理
5.1.1样品制备
固体样品和半固体样品经组织捣碎机捣碎混匀后备用：液体样品摇匀后备用.
5.1.2试样处理
5.1.2.1蒸馏法
准确称取25g（精确至0.01g）试样，置于500mL蒸馏瓶中，加人100mL水，再用50mL水冲洗容置于冰浴中作为吸收液装置，待蒸馏至约240mL时取出，在室温下放置30min，用1mol/1磷酸溶液调pH为3左右，加水定容至刻度，摇匀，经0.45μm水相微孔滤膜过滤后，待液相色谱测定.
5.1.2.2漫提法（适用于面包、糕点）
0.50mL，混匀，经超声浸提10min后，用1mol/L磷酸溶液调pH为3左右.转移全部试样至50mL 准确称取5g（精确至0.01g）试样至于100mL烧杯中，加水约25mL，加人1mol/L磷酸溶液容量瓶中，用水定容至刻度，摇匀.将试样转移至50mL离心管中，以不低于4000r/min离心10 min，待净化.
相萃取柱上.用5.0mL甲醇-水溶液（1090）淋洗，真空抽至柱体近干.再加人5.0mL.甲醇-水溶液 固相萃取柱依次用5mL甲醇和5mL水活化，保持柱体湿润.立即取5.0mL待净化液加载至固（4060）洗脱，收集洗脱液并定容至5.0mL，混匀，经0.45gm有机微孔滤膜过滤后，待液相色谱测定.
5.2仪器参考条件
5.2.1色谱柱：耐水型C柱，4.6mm×250mm-5m或同等性能的色谱柱.
5.2.2流动相：1.5g/L磷酸氢二铵溶液，用1mol/L磷酸溶液调pH为2.7~3.5.5.2.3流速：1.0mL/min.5.2.4柱温：25℃C5.2.6波长：214 nm. 5.2.5进样量：20pl.
5.3标准工作曲线的制作
5.3.1蒸馏法
准确吸取标准储备液0.250ml0.500mL、1.00mL、2.50mL.、5.00mL.、12.5ml置于500mL蒸馏瓶中，其他操作同5.1.2.1样品前处理，其丙酸标准溶液的最终浓度分别为0.0100mg/mL、0.020 0 mg/mL 0 040 0 mg/mL 0.100 mg/mL 0.200 mg/mL 0 500 mg/mL 经 0.45 μm 水相微子混 膜过滤，浓度由低到高进样，以浓度为横坐标，以峰面积为纵坐标，绘制标准曲线，丙酸标准溶液的色诺图参见附录A图A.1.
5.3.2浸提法
瓶中，分别加人1mol/L磷酸0.20mL，用水定容至10mL，混匀.其丙酸标准溶液的最终浓度分别为 准确吸取标准中间液0.100 mL、0.200mL、0.400 mL、1.00mL、2.00mL、5.00mL至10mL 容量0.010 0 mg/mL、0.020 0 mg/mL、0 040 0 mg/mL、0. 100 mg/mL、0.200 mg/mL 0.500 mg/mL 经0.45μm水相微孔滤膜过滤，浓度由低到高进样，以浓度为横坐标，以峰面积为纵坐标，绘制标准曲线，丙酸标准溶液的色谱图参见附录A中图A.2.
5.4试样溶液的测定
处理后的样液同标准系列同样注人液相色谱仪测试，根据标准曲线计算样品中的丙酸浓度.待测样液中丙酸响应值应在标准曲线线性范围内，超出浓度线性范围则应稀释后再进样分析.
6分析结果的表述
6.1蒸馏法样品中丙酸及其盐含量（以丙酸计）按式（1）进行计算.
式中：
X 一样品中丙酸及其盐含量（以丙酸计），单位为克每千克（g/kg）；p 样液最终定容体积，单位为毫升（mL）； 由标准曲线得出的样液中丙酸的质量浓度，单位为毫克每毫升（mg/mL）；V 1000-换算系数；样品质量，单位为克（g）；f 稀释倍数.
6.2浸提法样品中丙酸及其盐含量（以丙酸计）按式（2）进行计算.
式中：
X 样品中丙酸及其盐含量（以丙酸计），单位为克每千克（g/kg）； 由标准曲线得出的样液中丙酸的质量浓度，单位为毫克每毫升（mg/mL）；P
