中华人民共和国国家标准
棉花原（良）种产地检疫规程
Plant quarantine rules for producing areas ofstock(superior）cotton seed
1适用范围
本规程适用于各类型的棉花原（良）种繁育基地.
2名词解释
检疫对象的棉花原（良）种和棉花原（良）种生长期间的田间检疫调查及必要的室内检验等.
2.2病点：1～3株集中在一起的病株，称作-一个病点.
3检疫对象
棉花枯萎病{（Fusariumoxysponum f.sp.vasinfectum（Atk）Snyder&Hansen）棉花黄萎病【VerticilliumdanliaeKleb】
4无检疫对象棉花原（良）种的繁育
4.1基地的选择
4.1.1基地必须建立在经严格调查无棉花枯、黄萎病发生的地区.
4.1.2在棉花枯、黄萎病发生的地区，基地必须具有大面积的无病田.并且无病田周围具有隔离条件（远离交通要道和村庄，周围不与棉田相连，地势稍高），发现检疫对象后能够进行水旱轮作.
4.2种子的来源和消毒
4.2.1基地种子来自无病区，并经检疫不带检疫对象.
4.2.2播种前必须进行消毒处理，处理方法选用下列之一：
4.2.2.1有效成分0.3%多菌灵胶悬剂液浸种（注意搅拌14h后晾、晒干播种）.
4.3防疫措施
4.3.1基地不承担各种棉花品种（品系）区试任务.
4.3.2基地内确需引进的新品种和繁殖材料，必须报请当地植检部门同意.引进材料按4.2.2进行严格消毒处理后，在隔离观察圃内利于发病的环境条件下，试种二年以上，未发现检疫对象方能在基地内使用.
4.8.3基地内严禁使用未经热榨的棉饼及其下脚料还田.
4.3.4防止病区与无病区间流水串灌.
4.3.5不使用带菌土育苗移裁，营养钵育苗土壤要经过棉隆消毒处理.
4.3.6禁止从病区引进带菌土的瓜、菜秧苗等.
4.3.7基地应做到“四专”：专具管理或耕锄；专场晒花；专仓存放；专机轧花.
4.4疫情处理
4.4.1发现病株率在0.1%以上（不含0.1%）的病田棉籽不作种用.
4.4.2严格封锁病田：作好病株标记；拔除并集中销毁病株及病残体，清除杂草寄主；及时消毒处理病点土壤（处理技术见附录E）.
4.4.3实行水旱轮作三年以上.
5检疫签证
5.1田间检查
5.1.1时间：每年进行三次，即董期、花铃期和吐絮后期.蓄期以棉枯萎病为主，花铃期以棉黄萎病为主.
5.1.2检查要求：第一、二次要求全面调查，块块查到，一株不漏.后期剖杆数，株行圃50%，株系圃10%，原种圃和繁殖基地可根据上段检查疑点进行抽样剖查.隔离观察圃的新材料要求全部剖杆检查.
5.2室内检查
5.2.1主要检查设备：
显微镜 一台冰箱一台恒温箱 二台高压消毒锅 二台接种箱（超净台）一个（台）培养m 200副酒精灯 四个500ml三角瓶 20只
5.2.2病残体检验方法选用下列之；
5.2.2.1保湿培养：取可疑病株的枝、茎一小段，清洗干净后，剥去表皮，用70%酒精表面消毒3min或0.1%升汞液（升汞1g，浓盐酸2.5ml，水1000m1配制）消毒1～3min，并用消毒水冲洗3次（新鲜病苗可以先在95%酒精里预浸后，在酒精灯火焰上烧去酒精，撕去表皮），再将木质部削成3～5cm长的小块，放在滴有无菌水滴的载玻片上，每片放3～4块，将玻片放人垫有双层吸水纸或脱脂棉的培养Ⅲ内，盖好皿盖置于20.0～22.5℃或27～30℃温箱诱发黄萎病和枯萎病，或直接放在房间进行保温培养，2～5天后，长出白色菌丝体时，直接用显微镜检查，鉴定枯、黄萎病病菌.
5.2.2.2组织分离：组织分离要在无菌室（超净台）或接种箱酒精灯火焰灭菌条件下进行.将病株茎杆剥去表皮洗净，用0.1%升汞液表面消毒1min或10%漂白粉表面消毒3min，用灭菌水冲洗3次，然后用灭菌剪刀剪取长约5mm的小块，置于经灭菌和凝固了的马铃薯琼脂培养基平面上（培养基：马铃署200g，蔗糖158，粗琼脂20g，水1000m1），每皿放5～6块，在24～26℃温箱中培养5~15天，先用肉眼检查菌落，然后进行镜检.如怀疑枯、黄萎病混生，可选择单纯的琼脂培养基（琼脂20g，水1000m1）使黄萎病菌能同时生长出来.
5.2.2.3种子检验：
5.2.2.3.1流水冲洗：将应检种子置于三角瓶中（500m1三角瓶可放种子50～100粒），瓶口罩上铁网或纱布，取橡皮管一段，一端连接在自来水龙头上，另一端接一玻管，插人三角瓶，开放龙头，在流水下冲洗24h，如无流水冲洗条件，可将棉籽放人70%酒精中浸2～3s除去气泡，然后置于0.1%升汞液中消毒2min，再用灭菌水冲洗2～3次.或将棉籽放在20%漂白粉液中浸3～5min，无需冲洗.
5.2.2.3.2分离：将冲洗或消毒过的种子，用灭菌镊子移放在分离黄萎病菌的琼脂培养基和分离枯萎病菌的吗铃薯蔗糖琼脂培养基平面上，每皿放5粒，置22～25℃左右的温箱培养10～15天，用低倍镜检查每粒棉籽周围有无枯、黄萎病菌，并用高倍镜检有无大分生孢子来确定是否枯萎病菌，记载
两种病菌带菌率.
种子抽样数量要求在总重量的1%左右，分离数量应在1000粒以上.
5.3记录检查结果，填写田间调查表和室内检查单（表、单格式见附录C、A），建立资料档案，并将调查和检验结果上报上级检疫机关.
5.4出证
5.4.1经田间检查和必要的室内分离培养，对未发现检疫对象的基地的棉籽可签发“棉种产地检疫合格证”（格式见附录B）.
5.4.2经田间检查发现零星病棉株在0.1%（含0.1%）以下的种子田，拔除病株，土壤消毒处理后，同一地块的种子签发“棉种消毒处理通知单”，在植物检疫部门监督下进行种子消毒处理后，限制在病区内使用，不得调人无病区.
附录A室内检验报告单（补充件）
检验人：
单位：
应检对象 检验材料 检验数量 检验方法 结果 备注(FV) (组织种子） (块粒） （统计带菌率，%）
棉花种子产地检疫合格证（补充件）
检疫日期： 年 月 日 字第 号品种名称 繁殖数量繁殖面积亩 kg繁殖单位： 负责人：
检验结果：
