中华人民共和国农业行业标准
月季霜霉病抗性鉴定技术规程
Technical code ofpractice foridentification ofresistance torose downymildew(Peronospora sparsa Berk.)
前言
本文件按照GB/T1.1-2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起草.
请注意本文件的某些内容可能涉及专利.本文件的发布机构不承担识别专利的责任.
本文件由农业农村部种植业管理司提出并归口.
本文件起草单位：云南省农业科学院花卉研究所、国家观赏园艺工程技术研究中心、农业农村部花卉产品质量监督检验测试中心（昆明）、云南省花卉工程技术研究中心、云南省花卉育种重点实验室、全国农业技术推广服务中心、云南大学、中国农业大学.
本文件主要起草人：王丽花、杨秀梅、瞿素萍、王继华、刘哲、张艺萍、张钊、许风、王其刚、吴学尉、张丽芳、苏艳、蒋亚莲、单芹丽.
月季霜霉病抗性鉴定技术规程
1范围
本文件规定了月季（Rosa spp.）种质对霜霉病（病原菌Peronospora sparsa Berk.）抗性鉴定的技术方法和程序，包括设施设备及耗材、病原物接种体制备、鉴定方法、病情调查、抗性评价和鉴定完成后材料的 处理.
本文件适用于室内人工接种鉴定和评价月季种质对霜霉病的抗性.
2规范性引用文件
件，仅该日期对应的版本适用于本文件：不注日期的引用文件，其最新版本（包括的修改单）适用于本 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款.其中，注日期的引用文文件.
NY/T3114.3一2017大豆抗病虫性鉴定技术规范第3部分：大豆抗霜霉病鉴定技术规范
3术语和定义
NY/T3114.3一2017界定的以及下列术语和定义适用于本文件.为了便于使用，以下重复列出了NY/T3114.3-2017中界定的术语和定义.
3.1
月季霜霉病rosedownymildew
菌纲霜霉目霜霉科霜霉属专性寄生菌，主要危害叶片、嫩梢、花梗及花，病斑黄褐色或灰褐色，空气潮湿时 月季霜霉病是一种卵菌病害其病原物为蔷薇霜霉菌（Peronospora sparsaBerk.）.属藻界卵菌门卵在叶背病斑处可见灰白色霜状霉层，病斑呈多角形渐变为灼烧状，初期直径2mm～6mm，严重时整株叶片脱落，新梢枯死.
3.2
抗病性签定identification of disease resistance
通过适宜技术方法鉴定植株对特定病害的抵抗能力.
[来源;NY/T 3114.3-2017 2. 3]
抗性评价evaluation of resistance
根据采用的技术标准判别植物对特定病害侵染后的发病程度和抵抗水平.
[来源：NY/T3114.3-2017 2.4 有修改]
3. 4
病情指数disease index
衡量植株发病率和严重度的综合指标.通过对植株个体发病程度（病情级别）数值的综合计算所获得
的群体发病程度的数值化描述形式，记作DI.
3.5
病原物接种体pathogenicinoculum
用于接种以引起特定病害的病原物或病原物的繁殖体.
孢子悬浮液inoculum suspension
特定病原菌用无菌水洗脱后用于接种的定量接种体稀释液.
NY/T 4510-2025
[来源：NY/T3114.3-2017 2.9 有修改]
4设施设备及耗材
4.1设施设备
4.2耗材
接种盘、培养皿、锥形瓶、纱布、酒精灯、穴盘、保鲜膜、滤纸等.
5病原物接种体制备
5.1病原物采集和鉴定
田间采集具有典型病症的月季霜霉病叶片，放人封口袋密封并登记编号带回实验室.挑取叶背面霉层制作分离物显微观察玻片，在生物显微镜下开展病原菌形态学鉴定，确认为月季霜霉病病原物后，经科赫氏法则（Koch'spostulates)验证保存备用.月季霜霉病病原菌相关资料见附录A.
5.2接种病原物纯化
鉴定为携带月季霜霉病菌的叶片用灭菌蒸馏水冲洗，应着重冲洗叶片病斑处的老霉层，然后叶背朝上平铺于经灭菌水湿润过的滤纸上，黑暗保湿培养，培养条件为温度（18土2）℃，空气相对湿度100%.3d~5d后置于18001x~32001x的光照条件下，待病斑长出大量灰白色霉层时，用灭菌毛笔无菌水，将病斑上新形成的霉层（孢子囊）刷于无菌培养皿中，获得纯化的病原物接种体分离物.
5.3病原物繁殖
在分离物少的情况下，应进行病原物接种体的繁殖，选择感病品种中度成熟叶片，自来水冲洗后无菌水冲洗1次~2次，75%酒精表面消毒20s~30s.将叶片背面朝上置于灭菌瓷盘或塑料盘中，盘底部附有浸透无菌水的滤纸，并用无菌细针对每片叶集中针刺2次～3次，造成细小伤口，用无菌移液器吸取接种液，滴于针刺部位1滴~2滴，每滴15μL~20gL，用保鲜膜封严繁殖接种盘，置于温度为（18土2）℃，空5. 2. 气相对湿度为85%～90%的培养室，5d～7d可获得布满月季霜霉病孢子囊的大量病叶，孢子囊收集同
5.4病原物保存
可活体保存或病叶冷冻保存.中短期菌种保存时宜采用活体保存，即在适宜环境条件下，定期将月季冻存管储藏于液氮中.并定期更换或补充液氮. 霜霉菌人工接种于感病寄主上保存.长期菌种保存时宜采用病叶冷冻保存，即将病叶放人有10%甘油的
6鉴定方法
6.1鉴定室
人工接种鉴定室应具备人工调节温度、湿度及光照条件，使人工接种后具备良好的发病环境.温度可
调范围为1℃~35℃，湿度可调范围为60%~100%，光照可调范围为20001x~60001x或黑暗.
6.2鉴定材料的数量
每份鉴定材料重复3次，每一次重复10株苗或20片生长状态较一致的叶片.
6.3鉴定对照材料要求
应分别设1个～2个高抗月季种质为抗病对照，1个～2个高感月季种质为感病对照，同时设置空白对照.推荐性抗、感月季种质材料见附录B.
6.4鉴定材料准备
6.4.1聊化组培苗
对照品种、待鉴定品种取茎段为外植体，经组培技术手段获得生根苗，移裁至隔离温室中专门划定的区域进行炼苗驯化.驯化基质为经消毒的泥炭（规格0mm~10mm）、蛭石（规格1mm~6mm）、珍珠岩（规格3mm~6mm）、细河沙等组成的混合基质，推荐配方泥炭：蛭石：珍珠岩按4：3：3配比，或河2
