NY
中华人民共和国农业行业标准
NY/T4685-2025
混合型饲料添加剂酸度调节剂中有 机酸的测定高效液相色谱法
Determination of organic acids in acidity regulators as feed additiveblender-High performance liquid chromatography
中华人民共和国农业农村部 发布
前言
本文件按照GB/T1.1-2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起草.
请注意本文件的某些内容可能涉及专利.本文件的发布机构不承担识别专利的责任.
本文件由农业农村部畜牧兽医局提出.
本文件由全国饲料工业标准化技术委员会（SAC/TC76）归口.
本文件起草单位：四川威尔检测技术股份有限公司、通威农业发展有限公司、广东酸能生物科技有限公司、上海正正生物技术有限公司.
本文件主要起草人：张风秤、张艳红、易倩、杨发树、张璐、何谦泰、沈如香、李海蓉.
混合型饲料添加剂酸度调节剂中有机酸的 测定高效液相色谱法
1范围
本文件描述了混合型饲料添加剂酸度调节剂中有机酸的高效液相色谱测定方法.
石酸、苹果酸、乳酸、甲酸、乙酸、富马酸、丙酸、丁酸（包括前述有机酸的盐）以及苯甲酸和山梨酸（不包括 本文件适用于粉末型、额粒型、液体型和脂肪酸酯包被型混合型饲料添加剂酸度调节剂中柠橡酸、酒其盐）的测定.
本文件柠檬酸、酒石酸、苹果酸、乳酸、甲酸、乙酸、丙酸和丁酸的检出限均为0.02%、定量限均为0.06%，富马酸的检出限为0.0001%、定量限为0.0003%，苯甲酸和山梨酸的检出限均为0.001%定量限均为0.003%.
2规范性引用文件
下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款，其中，注日期的引用文本文件. 件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括的修改单）适用于
GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法
3术语和定义
本文件没有需要界定的术语和定义.
4原理
用硫酸溶液超声提取试样中的柠檬酸、酒石酸、苹果酸、富马酸、乳酸、甲酸、乙酸、丙酸和丁酸，用甲醇超声提取苯甲酸和山梨酸，高效液相色谱仪测定，外标法定量.
5试剂或材料
除非另有规定，仅使用分析纯试剂.
5.1水：GB/T6682规定的一级水，5.2甲醇：色谱级.5.3硫酸溶液I（30mmol/L)：量取1.7mL硫酸，缓慢注人至700mL水中，边加人边搅拌，冷却至室5.4氢氧化钠溶液（5mol/L）：称取200g氢氧化钠，缓慢加人约700mL水，搅拌、溶解，冷却至室温，用 温，用水稀释至1000mL，混匀.水稀释至1000mL.混匀.5.5硫酸溶液Ⅱ：量取200mL硫酸，缓慢注入至700mL水中，边加人边搅拌，冷却至室温，用水稀释至1 000mL，混匀.5.6磷酸盐缓冲溶液：称取2.5g无水磷酸二氢钾和2.5g三水合磷酸氢二钾，加人适量水溶解，用水定5.7有机酸标准品：柠檬酸、酒石酸、苹果酸、富马酸、乳酸、甲酸、乙酸、丙酸、丁酸、苯甲酸和山梨酸等11 容至1000mL，混匀.种有机酸标准品的CAS号、纯度等见附录A.5.8柠檬酸、酒石酸、苹果酸、乳酸、甲酸、乙酸、富马酸、丙酸、丁酸标准储备溶液（5mg/mL)：准确称取柠檬酸、苹果酸、乳酸、甲酸、乙酸、富马酸、丙酸和丁酸标准品各约50mg（精确至0.01mg），分别置于10mL容量瓶中，用硫酸溶液I（5.3）溶解、定容，混匀.于2C～8C保存，有效期3个月.
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5.9苯甲酸、山梨酸标准储备溶液（1mg/mL）：准确称取苯甲酸、山梨酸标准品各约50mg（精确至0.01mg），分别置于50mL容量瓶中，用甲醇（5.2）溶解、定容，混匀.于2℃～8C保存，有效期6个月.5.10富马酸标准中间溶液（200pg/mL）：准确移取1mL富马酸标准储备溶液（5.8）于25mL容量瓶5.11柠檬酸、酒石酸、苹果酸、乳酸、甲酸、乙酸、丙酸、丁酸混合标准系列溶液：准确移取适量柠檬酸、 中，用硫酸溶液1（5.3）稀释、定容，混匀.临用现配.酒石酸、苹果酸、乳酸、甲酸、乙酸、丙酸、丁酸储备溶液（5.8）.用硫酸溶液I（5.3）稀释定容，配制成质量浓度分别为5pg/mL、10 yg/mL、25μg/mL、50μg/mL. 100pg/ml.、500μg/ml混合标准系列溶液.临用现配，5.12富马酸标准系列溶液；准确移取适量富马酸标准中间溶液（5.10).用硫酸溶液I（5.3）稀释定容，配制成质量浓度分别为 0. 2 μg/mL、 0. 4 μg/mL、1 μg/mL、2 μg/mL、4 μg/mL 20 μg/mL 富马酸标准系列 溶液，临用现配，
注：因苹果酸标准品中含有一定量的富马酸，同时富马酸的响应比其他8种有机酸高两个数量级，因此需要单独配制富马酸标准系列溶液，以免影响试样溶液中富马酸的定量.
5.13苯甲酸、山梨酸混合标准系列溶液：分别准确移取适量苯甲酸、山梨酸储备溶液（5.9），用磷酸盐缓冲溶液（5.6）稀释、定容配制成质量浓度分别为0.5μg/mL、2μg/mL、10μg/mL.20μg/mL、50μg/mL、 100pg/mL苯甲酸、山梨酸混合标准系列溶液.临用现配.
5.14微孔滤膜：0.45pm，水系5.15微孔滤膜：0.45μm，有机系.
6仪器设备
6.1高效液相色诺仪：配紫外检测器或二极管阵列检测器.6.2分析天平：精度为0.1mg和0.01mg.6.3超声波清洗器.6.4pH计：精度为0.01，或使用pH1.4~3.0的精密试纸.
7样品
取代表性的样品200g，尽快装人耐酸、耐腐蚀的容器中，立即密封，尽快分析.
8试验步骤
8.1试样提取
8.1.1柠檬酸、酒石酸、苹果酸、乳酸、甲酸、乙酸、富马酸、丙酸和丁酸
8.1.1.1粉末型、题粒型和液体型
液I（5.3），超声提取20min，冷却至室温.若需要检测乳酸含量，称样后加人30mL~40mL水、4mL 平行做2份试验.称取0.5g~2g试样，精确至0.1mg，置于250mL三角瓶中，加人60mL硫酸溶100mL容量瓶中，用少许硫酸溶液I（5.3）冲洗三角瓶3次～5次，洗液并人容量瓶中，用硫酸溶液I（5.3）稀释、定容，摇匀，过微孔滤膜（5.14），备用.
注：高浓度乳酸常发生脱水生成丙交酯，需用强碱皂化.
8.1.1.2脂肪酸酯包被型
除超声温度为80℃外，其他同8.1.1.1.
8.1.2苯甲酸和山梨酸
平行做2份试验.称取0.5g~2g试样，精确至0.1mg，置于100mL容量瓶中，加人10mL甲醇（5.2），超声提取20min，冷却至室温，用磷酸盐缓冲溶液（5.6）稀释、定容，摇匀，过微孔滤膜（5.15），2
