NY
中华人民共和国农业行业标准
牛乳及其制品中α-乳白蛋白和β-乳 球蛋白的测定高效液相色谱法
Determination of αlactalbumin and β-lactoglobulin in milk anddairy products-High performance liquid chromatography
中华人民共和国农业农村部 发布
前言
本文件按照GB/T1.1-2020（标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起草.
请注意本文件的某些内容可能涉及专利.本文件的发布机构不承担识别专利的责任.
本文件由农业农村部畜牧兽医局提出.
本文件由全国畜牧业标准化技术委员会（SAC/TC274）归口.
本文件起草单位：中国农业科学院北京畜牧兽医研究所、农业农村部奶产品质量安全风险评估实验室（北京）、农业农村部奶及奶制品质量检验测试中心（北京）、中优乳奶业研究院（天津）有限公司、唐山市食 品药品综合检验检测中心、内蒙古智慧质量中心有限公司、黑龙江飞鹤乳业有限公司.
本文件主要起草人：郑楠、刘慧敏、张宁、叶巧燕、陈岭军、周淑萍、屈雪寅、郭洪侠、张慧萍、王象欣.
牛乳及其制品中α-乳白蛋白和β-乳球蛋白的测定 高效液相色谱法
1范围
本文件描述了牛乳及其制品中α-乳白蛋白和β-乳球蛋白测定的高效液相色谱方法.
本文件第一法适用于生牛乳和巴氏杀菌牛乳中a-乳白蛋白和β-乳球蛋白的测定；第二法适用于高温杀菌牛乳、灭菌牛乳、牛乳粉和牛乳基婴幼儿配方乳粉中α-乳白蛋白和β乳球蛋白的测定.
本文件生牛乳和巴氏杀菌牛乳中α乳白蛋白定量限为25mg/kg，β-乳球蛋白定量限为100mg/kg：牛乳基要幼儿配方乳粉中α-乳白蛋白定量限为250mg/kg，β-乳球蛋白定量限为500mg/kg.
注：本文件仅适用于未变性的α乳白蛋白和B-乳球蛋白的测定.
2规范性引用文件
仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括的修改单）适用于本文 下列文件中的内容通过文中的规范性引用面构成本文件必不可少的条款，其中，注日期的引用文件，件.
GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法
3术语和定义
本文件没有需要界定的术语和定义.
第一法反相液相色谱法
4原理
白仍保留在溶液中，离心后用高效液相色谱仪测定，外标法定量. 试样用水溶解，调节pH至4.60.使酪蛋白和变性的乳清蛋白沉淀，未变性的α-乳白蛋白和β-乳球蛋
5试剂或材料
5.1水：应符合GB/T6682规定的一级水， 除非另有规定，仅使用分析纯试剂.5.2三氟乙酸：色谱级.5.3乙酸：优级纯.5.4乙睛：色谱级.5.5三氯乙酸溶液（0.1%）：准确移取1mL三氟乙酸（5.2），用水定容至1L.混匀，临用现配，配.5.7混合标准储备溶液（10mg/mL）：准确称取适量α-乳白蛋白标准品（CAS号：9051-29-0，纯度≥ 95%）和β-乳球蛋白标准品（CAS号：9045-23-2，纯度≥95%）于10mL容量瓶中，用水稀释并定容，混匀.一20C以下保存，有效期3个月.5.8混合标准中间溶液（200mg/L）：准确移取200μL混合标准储备溶液（5.7）.用水稀释并定容至10mL，混匀.临用现配.5.9混合标准系列溶液：准确移取一定量的混合标准中间溶液（5.8），用水稀释并定容，配制成浓度分别
NY/T 4630-2025
为 1 mg/L 、5 mg/L、10 mg/L、20 mg/L、50 mg/L、100 mg/L 和 200 mg/L 混合标准系列溶液.临用现配.
5.10微孔滤膜：水系，0.22pm.
6仪器设备
6.1液相色谱仪：配紫外检测器或二极管阵列检测器.6.2天平：精度为0.1mg 和0.01 mg.6.3旋涡混合器.6.5pH计：精度为士0.01. 6.4离心机：转速不低于12000r/min.
7样品
取生牛乳或巴氏杀菌牛乳约200g混匀，装入洁净容器中.立即测定.
8试验步骤
8.1提取
平行做2份试验，称取试样5g（精确至0.1mg）于50mL离心管中，加15mL水混匀，用乙酸（5.3）调节pH为4.60士0.05后，转移至25mL容量瓶中，用水定容，混匀.转移至离心管中，静置10min以上，12000r/min离心10min.准确移取上清液1mL于5mL容量瓶中，用水定容，混匀.过膜（5.10）为试样溶液，待测，
8.2反相液相色谱参考条件
反相液相色谱参考条件如下：
a）色谱柱：C色谱柱（300A），柱长250mm，内径4.6mm，粒径3.5μm，或性能相当者.b）检测波长：210nm. c)流速：1.5mL/min.d）柱温：60℃.e）进样量：30p.f）流动相：A为三氟乙酸溶液（5.5），B为三氟乙酸乙晴溶液（5.6）：梯度洗脱条件见表1.
表1梯度洗脱条件
时间 A Bmin %95 56.5 10 62 62 38 3822 59 4122. 5 40 6027. 5 40 6028 95 535 95
8.3测定
8.3.1标准系列溶液和试样溶液测定
在仪器的最佳条件下，分别取混合标准系列溶液（5.9）和试样溶液（8.1）上机测定.α-乳白蛋白和β-2
