NY
中华人民共和国农业行业标准
NY/T4888-2025
姜及其制品中姜黄素类化合物的测定 液相色谱-串联质谱法
Determination of curcumin pounds in ginger and its products-Liquid chromatography-tandem mass spectrometry
中华人民共和国农业农村部 发布
前言
本文件按照GB/T1.1-2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起草.
请注意本文件的某些内容可能涉及专利.本文件的发布机构不承担识别专利的责任.
本文件由农业农村部农产品质量安全监管司提出.
本文件由农业农村部农产品营养标准专家委员会归口.
本文件起草单位：中国农业科学院农业质量标准与检测技术研究所、中国农业科学院蓝菜花卉研究所、福建省农业科学院农业质量标准与检测技术研究所、上海市农业科学院、厦门市华测检测技术有限公 司、河北工程大学.
本文件主要起草人：翁瑞、吕君、傅建炜、徐东辉、刘贵巧、鄂恒超、许晓敏、陈燕婷、邱静、韦航、赵晓燕、郑鹭飞、蒋宜轩、钱永忠.
姜及其制品中姜黄素类化合物的测定 液相色谱-串联质谱法
1范围
本文件描述了姜及其制品中姜黄素类化合物含量的液相色谐-串联质谱测定方法.本文件适用于生姜、干姜、姜片及姜粉中姜黄素、去甲氧基姜黄素和双去甲氧基姜黄素含量的测定.
2规范性引用文件
下列文件中的内容通过文中的规范性引用面构成本文件必不可少的条款.其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括的修改单）适用于本文件.
GB5009，3食品安全国家标准食品中水分的测定GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法
3术语和定义
下列术语和定义适用于本文件.
3. 1
姜黄索类化合物curcuminoids
姜科、天南星科植物根茎中的酸性多酚类物质，主链为不饱和脂族及芳香族基团，为二酮类化合物.
4原理
姜及其制品中的姜黄素类化合物经甲醇提取，液相色谱-申联质谱仪测定，外标法定量.
5试剂和材料
除非另有说明，所用试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的一级水.
5.1试剂
5.1.1乙晴（CHN）：色谱纯. 5.1.2甲醇（CHO）：色谱纯.5.1.3甲酸（CHO）：色谱纯.
5.2.10.05%甲酸溶液：准确移取0.5mL甲酸（5.1.3）至1000mL容量瓶中，用水定容至刻度.5.2.20.05%甲酸乙睛溶液：准确移取0.5mL甲酸（5.1.3）至1000mL容量瓶中，用乙晴（5.1.1）定容至刻度.
5.3标准物质
5.3.1姜黄素（Curcumin，CHO ，CAS号：458-37-7），纯度≥98%.5.3.2去甲氧基姜黄素（Demethoxycurcumin.CHOCAS号：33171-16-3），纯度≥98%.5.3.3双去甲氧基姜黄素（Bisdemethoxycurcumin，CHO，CAS号：33171-05-0)，纯度≥98%.
5.4标准溶液配制
5.4.1标准储备溶液：分别称取姜黄素（5.3.1）、去甲氧基姜黄素（5.3.2）和双去甲氧基姜黄素（5.3.3）1.0mg（精确到0.00001g）于10mL棕色容量瓶，用甲醇（5.1.2）溶解并定容至刻度，配制成浓度为100mg/L的标准储备溶液，于4℃密封保存，有效期为1周.
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5.4.2标准工作溶液：移取适量标准储备液（5.4.1)，用甲醇（5.1.2）稀释成浓度为20μg/L、50pg/L、100μg/L.200pg/L.500pg/L、1000μg/1.的混合标准工作溶液，现配现用.
5.5材料
微孔滤膜：0.22pm有机相滤膜，
6仅器设备
6.1液相色诺-串联质诺仪：配有电喷雾离子源（ESI).6.2分析天平；感量0.01g、0.001g和0 00001g.6.3真空冷冻干燥机.6.5试验筛：孔径180um 6.4研磨仪.6.6超声波仪：频率不低于20kHz.6.7振荡器：振荡速度不低于250r/min6.8离心机，转速不低于10000r/min.
7分析步骤
整个实验过程应在避光条件下进行.
7.1试样的制备
7.1.1生姜：取代表性样品约1kg，清洗擦干后取可食部分切片，混匀，四分法缩分至约150g，在一70℃条件下真空冷冻干燥至水分含量≤5%.用研磨仪将其粉碎，全部过180um试验筛，一20℃下避光保存.水分含量测定按GB5009.3的规定执行.7.1.2干姜、姜片和姜粉：取代表性样品约100g，用研磨仪粉碎，全部过180pm试验筛，测定水分含量 后，一20℃下避光保存.水分含量测定按GB5009.3的规定执行.
7.2试样的提取
干姜、姜片和姜粉：称取试样约1g（精确至0.001g）于50mL塑料离心管中，加人30mL甲醇（5.1.2），涡旋1min后，在室温超声提取10min，随后250r/min振荡4h，于10 000r/min离心5min，取上清液经0.22pm有机相滤膜（5.5）过滤至棕色样品瓶，待测.
7.3测定
7.3.1液相色谱参考条件
具体参考条件如下：
a）色谱柱：C色谱柱，2.1mm×100mm，粒径2.5gm，或性能相当的色谱柱：b）流动相：A相为0.05%甲酸溶液（5.2.1)，B相为0.05%甲酸乙晴溶液（5.2.2）； c）流速：0.45 mL/min;d）进样量：5pLe）柱温：35℃；f）流动相梯度洗脱程序见表1.
表1流动相梯度洗脱程序
时间 min A相 B柑 %0 50 501. 5 2. 0 50 0 100 505. 0 100
表1（续）
时间 A相 B相 %5.1 min % 50 508 0 50 50
7.3.2质谱参考条件
具体参考条件如下：
b）电离源极性：正离子模式： a）电离源：电喷雾离子源；c）质谱扫描方式：多离子反应监测（MRM）；d) 电喷雾电压：3.6kV；e) 雾化温度：320C：g）姜黄素、去甲氧基姜黄素和双去甲氧基姜黄素的质谱分析参考参数见表2. f) 离子传输管温度：325℃C；
表2姜黄素、去甲氧基姜黄素和双去甲氧基姜黄素的质谱分析参考参数
保留时间 定量离子对 定性离子对 聚焦透镜电压 碰撞能量化合物 min m/s 309 1147 1 m/2 V eV双去甲氧基姜黄素 去甲氧基姜黄素 2.24 2.50 309.1225. 1 339. 2255. 1 339. 2147. 1 128 [48 13/21 15/21姜黄素 2.80 369. 2285. 1 369. 2177. 1 139 16/18
7.3.3定性测定
相同测试条件下，目标化合物在试样中的保留时间与标准物质的保留时间偏差不超过土2.5%，且相对离 通过试样中各组分的保留时间和特征离子与相应标准物质的保留时间和特征离子对照进行定性.在子丰度与浓度相当的标准物质的离子丰度偏差不超过表3的规定范围，可判定试样中存在目标化合物.
表3定性测定中相对离子丰度的最大允许偏差
单位为百分号
相对离子丰度 >50 >20-50 >10~20 ≤10允许相对编差 ±20 ±25 ±30 ±50
7.3.4定量测定
将试样溶液和标准工作溶液在相同的液相色谐-串联质谱条件下进行测定，以标准工作溶液浓度为横坐标，姜黄素、去甲氧基姜黄素和双去甲氧基姜黄素定量离子的峰面积为纵坐标作多点校准.姜黄素、去 甲氧基姜黄素和双去甲氧基姜黄素标准溶液的MRM色谱图见附录A中的图A.1.
8结果计算
试样中姜黄素、去甲氧基姜黄素和双去甲氢基姜黄素含量按公式（1）计算.
式中：
;从标准工作曲线得到的试样溶液中目标物质量浓度的数值，单位为微克每升（pg/L）； 以干重计；pi 试样溶液定容体积的数值，单位为毫升（mL）：试样称样质量的数值，单位为克（g）：X 试样中水分含量的数值，单位为克每百克（g/100g）.
试样中姜黄素、去甲氧基姜黄素和双去甲氧基姜黄素含量的数值，单位为毫克每千克（mg/kg），
