大豆转基因成分的快速检测 环介导等温扩增（LAMP）检测法
Rapid detection for genetically modified ponents in soybeans
--Loop-mediated isothermal amplification detection method
中国粮食商业协会 发布
目次
1范围.2规范性引用文件..3术语、定义和缩略语3.1术语和定义 3.2缩略语.3.2.1..CP4EPSPS 3.2.2. G2EPSPS .3. 2.3 ..G10evo-EPSPS 4原理.5仪器及材料6试剂.6.1试剂.. 6.2溶液配制7样品制备.7.1抽样和制样7.2样品前处理8样品测定8.1试液配制 8.2核酸扩增8.3结果判定，
T/CGTA 11-2025
前言
本文件按照GB/T1.1-2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起草.
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本文件由百沃特（天津）生物技术有限公司提出.
本文件由中国粮食商业协会归口.
本文件起草单位：百沃特（天津）生物技术有限公司、中粮营养健康研究院有限公司、北大荒粮食集团有限公司、黑龙江象屿农业物产有限公司、通标标准技术服务（青岛）有限公司.
本文件主要起草人：马增彬、钱承敬、优磊、刘晓萌、王健、李俊、于旭德、韩翼、杨若松、龚雅云.
大豆转基因成分的快速检测环介导等温扩增（LAMP）检测法
1范围
本文件规定了大豆中转基因成分环介导等温扩增快速检测方法的术语和定义、原理、仪器与设备、试剂与材料、样品制备、检测方法和判定规则的要求.
本文件适用于大豆中转基因成分CP4-EPSPS、G2-EPSPS和G10evo-EPSPS核酸序列的快速检测.
2规范性引用文件
下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款.其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件：不注日期的引用文件，其最新版本（包括的修改单）适用于本文件.
GB/T5491粮食、油料检验扦样、分样法
GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法
GB/T19495.4转基因产品检测实时荧光定性聚合酶链式反应（PCR）检测方法
GB/T19495.7转基因产品检测抽样和制样方法
3术语、定义和缩略语
3.1术语和定义
GB/T19495.7界定的术语和定义适用于本文件.
3.2缩略语
3. 2. 1
CP4EPSPS
土壤农杆菌CP4蛋白基因和5-葬草酸-3-磷酸合成酶基因Agrobacterium tumefaciens strainCP4 Product: herbicide tolerant form of 5enolpyruvulshiikimate3-phosphate synthase.
3.2.2G2-EPSPS
T/CGTA 11--2025
荧光假单胞杆菌G2蛋白基因和5-葬草酸-3-磷酸合成酶基因AgrobacteriumtumefaciensstrainCP4 Product: herbicide tolerant form of 5-enolpyruvulshikimate-3-phosphate synthase .
3. 2. 3
G10evo-EPSPS
耐辐射球菌G10evo蛋白基因和5-草酸-3-磷酸合成酶基因Deinococcus radioduransCP4G10evo Product: herbicide tolerant form of 5-cnolpyruvulshikimate-3-phosphate synthase.
4原理
根据大豆内源基因、外源基因（CP4-EPSPS、G2-EPSPS和G10evo-epsps）序列设计特异性内引物和外引物各一对，建立LAMP反应体系.引物特异性识别目标序列，利用Bst酶启动循环链置换反应，在特异性目标序列启动互补链合成，在同一链上互补序列周而复始形成有很多环的花椰菜结构的茎-环DNA混合物，恒温反应结束后根据添加的染色液颜色变化情况进行结果判定.
5仪器及材料
5.1水浴锅或加热模块：温度可控制在65C土0.5C.5.4移液器：量程10uL-100 μuL：量程100uL-1000 μL：量程1mL-5mL.5.6容量瓶：1L5.7烧杯：1L.5.9真空冷冻干燥机.5.10涡旋振荡器.5.11计时器.
5.2离心管：5mL、1.5mL、200μL.
5.34联排冻干管及管盖：0.2mL.
5.5天平：感量0.01g.
5.8玻璃棒：20cm.
6试剂
6.1试剂
除另有说明外，试剂均为分析纯或生化试剂，实验室用水应符合GB/T6682中的一级水的要求.
6. 1. 1 1 M Tris-HC1 (pH 8.0).
