中华人民共和国国家标准
GB 31657.6-2025
食品安全国家标准 蜂产品中酰胺醇类药物残 留量的测定液相色谱-串联质谱法
National food safety standardDetermination of amphenicol in honey and royal jelly byliquid chromatography-tandemmass spectrometry method
中华人民共和国农业农村部中华人民共和国国家卫生健康委员会发布国家市场监督管理总局
前言
本文件按照GB/T1.1-2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起草.
食品安全国家标准 蜂产品中酰胺醇类药物残留量的测定 液相色谱-串联质谱法
1范围
用于蜂蜜和蜂王浆中氯霉素、甲矾霉素、氟苯尼考残留量的测定. 本文件规定了蜂产品中酰胺醇类药物残留量检测的制样和液相色诺-串联质谱测定方法.本文件适
2规范性引用文件
下列文件中的内容通过文中的规范性引用面构成本文件必不可少的条款，其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括的修改单）适用于本 文件.
GB/T6682分析实验室用水规则和试验方法
3术语和定义
本文件没有需要界定的术语和定义.
4原理
蜂蜜和蜂王浆中残留的药物分别用水和氨化乙晴提取，固相萃取柱净化，液相色谱-串联质谱测定，外
标法定量，
5试剂和材料
以下所用试剂除特殊注明外均为分析纯试剂，水为符合GB/T6682中规定的一级水.
5.1试剂
5.1.1甲醇（CHOH）：色谱纯.5.1.2甲酸（HCOOH）：色谱纯. 5.1.3乙晴（CH CN)：色谱纯，5.1.4氨水（NH OH）.5.1.5胰蛋白酶（CH;OP)：1 000U/mg~2 000 U/mg.
5.2溶液配制
5.2.150%乙晴溶液：取50mL乙睛用水稀释至100mL混匀.5.2.22%氨化乙睛溶液；取2mL氨水，用乙睛稀释至100mL，混匀.5.2.38%氨化甲醇溶液，取8mL氨水，用甲醇稀释至100mL，混匀.5.2.410%乙晴溶液：取10mL乙睛，用水稀释至100mL混匀. 5.3标准品及其纯度：氟苯尼考、甲祺霉素、氟苯尼考胺和氯霉素，含量均≥98%，具体信息见附录A
5.4.1酰胺醇类药物标准储备液：依次准确称取适量氯霉素、甲砜霉素和氟苯尼考标准品，用50%乙晴溶液溶解，配制成1000μg/mL的标准储备液.4℃避光保存，有效期6个月.中，用50%乙溶液定容至刻度，配制成浓度为10pμg/mL的酰胺醇类药物混合标准中间液.4C避光保存，有效期6个月.
GB 31657. 6-2025
5.4.3酰胺醇类药物混合标准工作液：吸取酰胺醇类药物混合标准中间液1.0ml，于10mL容量瓶中，用50%乙晴溶液定容至刻度，配制成浓度为1.0μg/mL的酰胺醇类药物混合标准工作液.4℃避光保存，有效期1个月.
5.5材料
5.5.1混合型强阳离子交换固相萃取柱或相当者：500mg/6ml.5.5.2尼龙滤膜：0.22pm.
6仪器和设备
6.1液相色谱-串联质谱仪：配有电喷雾离子源.6.3高速冷冻离心机：转速8000r/min或以上. 6.2涡动仪.6.4水浴振荡器.6.5氮吹仪.6.6分析天平：感量0.01mg和0.01g.
7试样的制备与保存
7.1试样的制备
取适量新鲜或解冻的空白或供试蜂产品，将其搅拌均匀，对有结晶的蜂蜜样品，在密闭情况下，置于不超过60℃的水浴中解晶，待样品全部融化后搅匀，冷却至室温.制备好的试样置于样品瓶中，密封，并做上标记.
a）取均质后的供试样品，作为供试试样；b）取均质后的空白样品，作为空白试样；c）取均质后的空白样品，添加适宜浓度的标准工作液，作为空白添加试样.
7.2试样的保存
蜂蜜样品于室温下避光保存：蜂王浆样品于一18℃下保存.
8测定步骤
8.1提取
称取蜂蜜试料（5±0.05）g于50mL具塞塑料离心管中，加人20mL水振荡1min，于4℃下8000r/min离心10min，全部液体转移至另一塑料离心管中，备用.
称取蜂王浆试料（2土0.05）g于50mL具塞塑料离心管中，加人0.25g胰蛋白酶、2mL水、振荡1min，37℃水浴反应2h，加人8mL2%氨化乙，涡旋振荡1min，于4℃下8000r/min离心10min，全部液体转移至另一塑料离心管中，于40C下氮吹至体积不变，吸取到离心管中用水定容至5mL，备用.
8.2净化
混合型强阳离子交换固相萃取柱（500mg/6mL)预先用10mL甲醇和10mL水活化，备用液全部过固相萃取柱，12mL水淋洗，7mL8%氨化甲醇洗脱，洗脱液于40℃下氮吹至近干，1.0mL10%乙晴落液复溶，经0.22pm尼龙滤膜过滤，供液相色谱-串联质谱测定.
8.3基质匹配标准曲线的制备
氮气吹干，加入10%乙晴溶液1.0mL涡旋溶解残余物，配制成浓度为0.1μg/L.、0.5μg/L、1.0pg/L、 精密量取混合标准工作液适量，分别加入经提取和净化的蜂蜜或蜂王浆空白试料残渣中，40C水浴10.0μg/L、50.Oug/L和100μg/L的基质匹配系列混合标准溶液，微孔滤膜过滤，供液相色谱-申联质谱测定，以待测物的峰面积的平均值作为纵坐标、标准溶液浓度为横坐标、绘制基质匹配标准曲线，求回归方程和相关系数.
