中华人民共和国国家标准
GB 31658.29-2025
食品安全国家标准 动物性食品中碘醚柳胺残留量的测定 高效液相色谱法
National food safety standardDetermination ofrafoxanidum residues in animal derivedfoodby high performanceliquid chromatography
中华人民共和国农业农村部中华人民共和国国家卫生健康委员会发布国家市场监督管理总局
前言
本文件按照GB/T1.1-2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起草.
食品安全国家标准 动物性食品中碘醚柳胺残留量的测定 高效液相色谱法
1范围
本文件规定了动物性食品中碘醚柳胺残留检测的制样和高效液相色谱测定方法.本文件适用于牛、羊的肌肉、肝脏、肾脏和脂肪组织中碘醚柳胺残留量的检测.
2规范性引用文件
仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括的修改单）适用于本 下列文件中的内容通过文中的规范性引用面构成本文件必不可少的条款，其中，注日期的引用文件，文件.
GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法
3术语和定义
本文件没有需要界定的术语和定义.
4原理
试样中残留的碘醚柳胺，经乙晴-丙酮溶液提取，混合型阴离子交换固相萃取柱净化，高效液相色谐一荧光法检测，外标法定量.
5试剂与材料
除另有规定外，试剂均为分析纯，水为符合GB/T6682规定的一级水.
5.1试剂
5.1.1乙晴（CHCN）色谱纯.5.1.2甲酸（HCOOH）：色谱纯. 5.1.3乙酸乙酯（CH O）.
5.2溶液配制
5.2.10.1%甲酸溶液：取0.1mL甲酸，加水至100mL，混匀.5.2.21%甲酸乙睛溶液，取1.0mL甲酸，加乙至100mL，混匀.5.2.3乙晴-0.1%甲酸溶液；取85mL乙睛，加0.1%甲酸水溶液15mL，混匀.5.2.4乙晴-丙酮溶液：取80mL乙睛加丙酮20mL混匀.
5.3标准品
碘醚柳胺（RafoxanideCHCl 1 NO，CAS号：22662-39-1)：含量≥98%.
5.4.1标准储备液：取碘醚柳胺标准品约10mg.精密称定加乙晴适量使溶解并稀释定容至100mL容量瓶，配制成浓度为100μg/mL的标准储备液.-18℃C以下避光保存，有效期3个月.5.4.2标准工作液：精密量取标准储备液5mL，于50mL容量瓶中.用乙晴定容至刻度，配制成浓度为10pg/mL混合标准工作液，4℃保存，有效期1周.
5.5材料
GB 31658.29-2025
5.5.1固相萃取柱：混合型阴离子交换柱，150mg/6ml，或相当者.5.5.2微孔尼龙滤膜：0.45pm.
6仪器和设备
6.1高效液相色谱仪：配荧光检测器.6.2分析天平：感量0.00001g和0.01g.6.3离心机.6.4组织匀浆机.6.5涡旋混合器.6.6周相萃取装置，6.7氮吹仪.
7试样的制备与保存
7.1试样的制备
取适量新鲜或解冻的空白或供试组织，绞碎，并使均质.a）取均质的供试样品，作为供试试样；b）取均质的空白样品作为空白试样； c）取均质的空白样品，添加适宜浓度的标准溶液，作为空白添加试样.
7.2试样的保存
18C以下保存.
8测定步骤
8.1提取
称取试料（5土0.05）g于50mL离心管中，加乙晴-丙酮溶液15mL，涡旋1min，10000r/min离心5min，移取上清液.残渣再用10mL乙晴-丙酮溶液重复提取1次，合并上清液.
8.2净化
柱，挤干.用1%甲酸乙溶液5mL洗脱，收集.洗脱液于40C水浴中氮气吹干.准确加乙睛1mL溶 固相萃取柱用5mL乙睛-丙酮溶液活化，加上清液，过柱.依次用乙酸乙酯5mL、乙睛5mL淋洗小解残渣，过0.45um滤膜，供高效液相色谱仪测定.
8.3标准曲线的制备
精密量取碘醚柳胺标准工作液适量，用乙精稀释成浓度为0.01μg/ml.0.05μg/mL、0.1μg/mL、0.5μg/mL、1μg/mL、5μg/mL的系列标准工作液，供高效液相色谱仪分析.以测得峰面积为纵坐标、标准溶液浓度为横坐标，绘制标准曲线.求回归方程和相关系数.
8.4测定
8.4.1高效液相色谱参考条件
a）色谱柱：C（4.6mm×250mm，粒径5pm），或相当者；b）流动相：乙睛0.1%甲酸溶液（8515，V/V）；d）检测波长：激发波长为335nm.发射波长为510nm； c）流速：1.0mL/min;e）柱温：30C；f）进样量：20pL.
8.4.2测定法
取试料溶液和标准工作液，做单点或多点校准，以相应药物的保留时间定性，被测试料中碘醚柳胺色
