中华人民共和国国家标准
GB 4789.34-2016
食品安全国家标准
食品微生物学检验 双歧杆菌检验
中华人民共和国国家卫生和计划生育委员会 国家食品药品监督管理总局 发布
前言
本标准代替GB4789.34-2012《食品安全国家标准食品微生物学检验双歧杆菌的鉴定》.本标准与GB4789.34-2012相比，主要变化如下：
增加了双歧杆菌的计数方法：增加了MRS培养基：修改了标准的适用范围：修改了附录B为可选项.
食品安全国家标准
食品微生物学检验双歧杆菌检验
1范围
本标准规定了双歧杆菌（Bjdobacteriam）的鉴定及计数方法.
鉴定，本标准适用于食品中仅含有双歧杆菌属的计数，即食品中可包含一个或多个不同的双歧杆菌 本标准适用于双歧杆菌纯菌菌种的鉴定及计数.本标准适用于食品中仅含有单一双歧杆菌的菌种菌种.
2设备和材料
除微生物实验室常规灭菌及培养设备外其他设备和材料如下：2.1恒温培养箱：36C士1℃2.2冰箱：2℃~5C.2.3天平：感量0.01g. 2.4无菌试管：18mm×180mm.15mm×100mm.2.5无菌吸管：1mL（具o.01mL刻度）、10mL（具0.1mL刻度）或微量移液器（200 μL~1 000μL）及配套吸头.
2.6无菌培养Ⅲ：直径90mm.
3培养基和试剂
3.3MRS培养基：见A.3 3.2PYG培养基：见A.2.3.6硫酸：分析纯.3.8乳酸：分析纯. 3.7冰乙酸：分析纯，
3.1双歧杆菌培养基：见A.1.
3.4甲醇：分析纯.
3.5三氯甲烷：分析纯.
4检验程序
双歧杆菌的检验程序见图1.
图1双歧杆菌的检验程序
5操作步骤
5.1无菌要求
全部操作过程均应遵循无菌操作程序.
5.2双歧杆菌的鉴定
5.2.1纯菌菌种
5.2.1.1样品处理：半固体或液体菌种直接接种在双歧杆菌琼脂平板或MRS琼脂平板，固体菌种或真空冷冻干燥菌种，可先加适量灭菌生理盐水或其他适宜稀释液，溶解菌粉.
5.2.1.2接种：接种于双歧杆菌琼脂平板或MRS琼脂平板.36C±1C厌氧培养48h士2h，可延长至72 h±2 h.
5.2.2食品样品
5.2.2.1样品处理：取样25.0g（mL），置于装有225.0mL生理盐水的灭菌锥形瓶或均质袋内，于 8 000r/min~10 000r/min均质1min~2min 或用拍击式均质器拍打1min~2min，制成1：10的条件解冻，时间不超过15min.
5.2.2.2接种或涂布：将上述样品匀液接种在双歧杆菌琼脂平板或MRS琼脂平板，或取0.1mL适当稀释度的样品匀液均匀涂布在双歧杆菌琼脂平板或MRS琼脂平板.36C士1C厌氧培养48h土2h， 可延长至72h士2 h.
5.2.2.3纯培养：挑取3个或以上的单个菌落接种于双歧杆菌琼脂平板或MRS琼脂平板.36C士1C厌氧培养48h±2h，可延长至72h士2h.
5.2.3菌种鉴定
5.2.3.1涂片镜检：挑取双歧杆菌平板或MRS平板上生长的双歧杆菌单个菌落进行染色，双歧杆菌为革兰氏染色阳性，呈短杆状、纤细杆状或球形，可形成各种分支或分叉等多形态，不抗酸，无芽孢，无动力.
化鉴定系统. 过氧化氢酶试验为阴性.双歧杆菌的主要生化反应见表1.可选择生化鉴定试剂盒或全自动微生物生
表1双歧杆菌菌种主要生化反应
编号 项目 两歧双歧杆菌 婴儿双歧杆菌 长双歧杆菌 青春双歧杆菌 动物双歧杆菌 短双歧杆菌(B bijfidu) (B infenzis) () (B adolescentis) (B enimalis) (B brese)1 1.-阿拉伯糖 2 D-核糖 - 3 D-木糖 1-木糖 - d 5 4 阿东醇 - -6 D-半乳糖 d d 7 D-葡萄 8 D-果糖 d d d 9 D-甘雾糖 10 1-山梨糖
