中华人民共和国国家标准
GB 4789.9-2025
中华人民共和国国家卫生健康委员会 国家市场监督管理总局 发布
前言
本标准代替GB4789.9-2014《食品安全国家标准食品微生物学检验空肠弯曲菌检验》.本标准与GB4789.9-2014相比，主要变化如下：
一修改了标准的范围： 修改了标准的名称：增加了实时荧光PCR鉴定方法和基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱鉴定方法；修改了设备和材料、培养基和试剂、检验程序、操作步骤；修改了附录.
食品安全国家标准 食品微生物学检验 空肠弯曲菌和结肠弯曲菌检验
1范围
本标准规定了食品中空肠弯曲菌（Campylobacter jejuxi）和结肠弯曲菌（Campylobacter coli）的检验方法.
本标准适用于食品中空肠弯曲菌和结肠弯曲菌的检验.
2设备和材料
2.1冰箱：2℃~8C、-18℃~-20℃. 除微生物实验室常规灭菌、培养及分子检测设备外，其他设备和材料如下.2.2恒温培养箱：25℃±1℃、36C±1℃、42℃±1℃.2.3拍击式均质器.2.5电子天平：感量0.1g.感量0.01g.感量0.001g. 2.4无菌带滤网均质袋.2.6恒温水浴或金属浴装置：36℃~100℃.2.7振荡器.2.8无菌培养Ⅲ，直径60mm、90mm. 2.9无菌亲水性滤膜：直径47mm，孔径0.45gm.2.10微需氧培养装置：提供微需氧条件（5%氧气、10%二氧化碳和85%氮气）.2.11显微镜：10×~1000×.2.12低温高速离心机：8000g~20000g，4℃2.13pH计或pH比色管或精密pH试纸. 2.14实时荧光PCR仪.2.15实时荧光PCR反应管.0~0~91 000 μL. 2.17无菌离心管：50mL、100mL或更大容量.2.18螺口管：10mL.2.19无菌接种环：1zL、10zL.2.20无菌吸管：1mL（具0.01mL刻度）、10mL（具0.1mL刻度）.2.21微生物生化鉴定系统. 2.22基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱仪（MALDI-TOFMS）.
3培养基和试剂
3.10.1%蛋白陈水：见附录A中A.1.
3.2无菌生理盐水：见A.2.3.3弯曲菌增菌液：见A.3.3.4哥伦比亚血琼脂（Columbia bloodagar）：见A.4.3.5卡玛丽血琼脂（Karmali blood agar）：见A.5.3.73%过氧化氢（HO）溶液：见A.7. 3.6氧化酶试剂：见A.6.3.8吲噪乙酸酯纸片：见A.8.3.91mol/L硫代硫酸钠（NaSO）溶液：见A.9.3.11微生物生化鉴定试剂盒或微生物生化鉴定系统试剂. 3.10马尿酸钠水解试剂：见A.10.3.12实时荧光PCR检测试剂盒或检测试剂（2×实时荧光PCR缓冲溶液、dNTPs.TagDNA聚合酶和灭菌去离子水）.3.13空肠弯曲菌参比菌株[NPRC（S）01.13897]或其他等效菌株.3.15乌普萨拉弯曲菌（Campylobacter upsaliensis）参比菌株[NPRC（S）01.13899]或其他等效菌株. 3.14结肠弯曲菌参比菌株[NPRC（S）01.13898]或其他等效菌株.3.16海鹏弯曲菌（Campylobacter lari）参比菌株[NPRC（S）01.1390o]或其他等效菌株.
4检验程序
空肠弯曲菌和结肠弯曲菌检验程序见图1.
图1空肠弯曲菌和结肠弯曲菌检验程序
5操作步骤
5.1样品处理
5.1.1一般样品
取25g（mL）样品[水果、蔬菜、水产品（贝类除外）取50g]加至装有100mL无菌0.1%蛋白陈水的有滤网的均质袋中，用拍击式均质器均质1min~2min（或者充分揉搓、振荡5min~10min）后经滤网过滤至离心管中，混过液以12000g4C离心15min后弃去上清（可多次离心富集），用1mL无菌生理盐水重悬沉淀，取1mL.的悬浮液加至盛有9mL弯曲菌增菌液中增菌培养.
5.1.2整禽等样品
用200mL~400mL无菌0.1%蛋白陈水充分揉搓样品内外部，振荡5min～10min后用无菌纱布或通过有滤网的均质袋过滤至离心管中，滤过液以12000g4℃离心15min后弃去上清（可多次离心培养.
