QB/T 5397-2019 大豆食品中异黄酮含量的测定.pdf

中华人民共和国轻工行业标准

QB/T5397-2019

大豆食品中异黄酮含量的测定

Determination of soybean isoflavones in soyfoods

中华人民共和国工业和信息化部 发布

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QB/T 5397-2019

共服务台本标准按照GB/T1.1-2009给出的规网起

本标准由中国食品工业协会提出并归口

术研发中心加工研究室、吉林农业大学食品科学与工程学院、四川省食品药品检验检测院、祖名豆制品 本标准起草单位：苏州金记食品有限公司、中国食品工业协会豆制品专业委员会、国家大豆产业技股份有限公司、上海清美绿色食品（集团）有限公司、深圳市福荫食品集团有限公司、山东禹王生态食业有限公司、长春维石检测技术服务有限公司、上海市豆制品行业协会、合肥市豆制品行业协会.

张建秋、张之斌、孙玉坤. 本标准主要起草人：吴月芳、金兴仓、于寒松、曾祥博、岳清洪、韩晓华、张凡芝、杨金平、刘军、王猛、

大豆食品中异黄酮含量的测定

1范围

本标准规定了大豆食品中异黄酮（大豆苷、染料木苷、大豆苷元、染料木素、黄豆黄素、黄豆黄苷）含量测定的高效液相色谱法.

本标准适用于原料大豆及豆浆、豆腐、腐乳等大豆食品中异黄酮含量的测定.

本标准测试方法的线性范围：0.5pg/mL~100μg/ml.

本标准测试方法的检出限：2.5pg/kg.

2规范性引用文件

下列文件对于本文件的应用是必不可少的.凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件.凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括的修改单）适用于本文件.

GB/T6682-2008分析实验室用水规格和试验方法

3术语和定义

下列术语和定义适用于本文件.

3.1

大豆异黄酮soybeanisoflavones

大豆生长过程中形成的一类次生代谢产物，以异黄酮葡萄糖苷和相应苷元形式存在的物质，包括大豆昔（Daidzin）、染料木苷（Genistin）、大豆苷元（Daidzein）、染料木索（Genistein）、黄豆黄素（Glycitein）、黄豆黄苷（Glycitin）.其分子式如下：大豆苷（CHO）、染料木苷（CHO）、大豆苷元（CHO）、 染料木素（CHO）、黄豆黄素（CHO）、黄豆黄苷（CHO）

4原理

高效液相色谱分析（C柱分离），在260nm条件下测定，依据保留时间定性，用外标法定量. 样品经过乙睛-水溶液振荡提取，提取液经离心、浓缩后用甲醇溶液（体积分数80%）定容、过滤，经

5试剂和材料

本标准使用符合GB/T6682一2008规定的一级水.除另有规定仅使用分析纯试剂.

5.1试剂

5.1.1甲醇（Methanol，CHOH）：色谱纯.5.1.3二甲基亚（DMSO.CHOS）. 5.1.2乙腊（Acetonitrile CHN）：色谱纯.5.1.4冰醋酸（Acetic Acid，CH COOH).

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5.2试剂配制

用80%甲醇（5.2.1）定容至50mL，混匀.5.2.3乙酸溶液（体积分数0.1%）：取1mL冰醋酸（5.1.4）用水定容至1000mL，混匀.

5.2.1甲醇溶液（体积分数80%），取800mL甲醇（5.1.1）用水定容至1000mL，混匀.

5.2.4乙酸乙腊溶液（体积分数0.1%）：取1mL冰醋酸（5.1.4），用乙晴（5.1.2）定容至1000mL，混匀.

5.3标准品

5.3.1大豆苷元（Daidzein，CHO :486-66-8 20 （%865.3.2 染料木素（Genistein， HO CAS 2-0.纯度：≥985.3.3 黄豆黄素（Glycite，CH CAS号：40957-83-3，纯度 98%5.3.5染料木苷 5.3.4 大豆苷（Daidm，CHO，CAS号：552-66-9，纯度：≥98%）5.3.6黄豆黄 借（Gltin，CHO，CAS号：40246-10-4，纯度：≥98%）. Genisur ，CHO，CAS号；529-59-9，纯度：98%）.

5.4标准品配制

5.4.1大夏异黄朗标准储备溶液：使川分折 置于容量瓶中 加人5mL 到准瑞称取6种大互异黄目标准品5mg分别 的单标标准储备液. 18 C避光保存 有效期 /m5.4.2 豆异黄酮单标中 洛液：分 豆异黄商标准储备溶液（54.1）加人体积分数为80 的甲醇溶液（5. mL容 与，配制威0.1mg/mL单标标准中间溶液.5.4.3大夏异黄酮混合标准工非溶藏：分 0C~4 吸取大豆异黄副操雅前备游液511）0.0025mL.0.005ml、0.025 mL、 0.05ml 0.1ml 015-ml.0 2-mL.0R26-m ml置于5mL容量瓶中用体票分数为80%的甲醇溶液（5. 1）定容，分别配制各组分浓度为0ugml.上pg/ml.5pg/ml10uml、20pg/ml、30 μg/ml、40 g/m50μg/mL、100pg/mL系列大豆异黄酮混合标准工作液用以制作标准曲线.0C~

4C冷藏避光保存，有效期1周.

6仪器和设备

6.1高效液相色谱仪：配有四元标度泵系统、柱温箱、紫外检训基、色谐工作站.

6.2分析天平：感量0.00001g和0.0001g.

6.3旋转蒸发仪.

6.4恒温摇床.

6.5冷冻离心机：转速不低于8000r/min.

6.6样品筛：60目.

6.7超声波振荡器.

6.8破壁料理机.

6.9组织粉碎机.

6.10滤膜：孔径为0.22um的有机滤膜.

6.11真空冷冻干燥机.

7试样制备与保存

7.1试样制备

7.1.1大豆

取样品200g～500g，用组织粉碎机（6.9）粉碎，使其全部通过样品筛（6.6），混匀，装人洁净面干燥的容器密封备用.

7.1.2豆浆

取100mL豆浆通过真空 冻干燥机（6 调成榜末并记录冻干粉碰量，装人洁净面干燥的容器，密封备用.

7.1.3豆腐（干）、度乳等大立食品

面干燥的容器密封务用. 取一定质量的豆所或其他豆制品经真空冷冻干燥机（6.11）制成粉末并记录族干粉质量，装入洁净

7.2试样保存

8.1提取

准确称取试样0.1g~1g（精确至在60于码 营中：间共中人0.5 mL乙腊（5.1.2）、2h.然后以10000r/n n的速度，在25C下离心5min，取上清液过滤.35C 转蒸发仪（6.3）浓缩至干，向其中加人5m ~10L甲醇溶液（体积分数80%）以溶解干物质，通过 计头过滤器过0.22um有机相滤膜（6.10）过 大机待额

同时，做试剂空白.

8.2色谱参考条件

色谱参考条件如下：

a）色谱柱：C柱（5μm、4.6mm×250mm），或相当型号色谱柱.b）流动相A：含有0.1%乙酸溶液（5.2.3）.流动相B：含有0.1%乙酸乙溶液（5.2.4）. c）流速：1.2mL/min.d）柱温：35℃.e）检测波长：260nm.f）进样量：10μl.g）梯度洗脱条件：见表1.

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