附件6
动物源性食品中克伦特罗、莱克多巴胺及 沙丁胺醇的快速检测胶体金免疫层析法 （KJ201706)
1范围
方法.
本方法规定了动物肌肉组织中克伦特罗、莱克多巴胺及沙丁胺醇的胶体金免疫层析快速检测
本方法适用于猪肉、牛肉等动物肌肉组织中克伦特罗、莱克多巴胺及沙丁胺醇的快速测定.
2原理
本方法采用竞争抑制免疫层析原理.样品中克伦特罗、莱克多巴胺、沙丁胺醇与胶体金标记的特异性抗体结合，抑制抗体和检测卡中检测线（T线）上抗原的结合，从而导致检测线颜色深浅的变化.通过检测线与控制线（C线）颜色深浅比较，对样品中克伦特罗、莱克多巴胺、沙丁 胺醇进行定性判定.
3试剂与材料
除另有规定外，本方法所用试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的二级水.
3.1 试剂
3.1.1甲醇：色谱纯.3.1.2氢氧化钠. 3.1.3磷酸二氢钾.3.1.4磷酸氢二钠.3.1.5 盐酸.3.1.6氯化钠.3.1.7氯化钾. 3.1.8三氮化钠.3.1.9乙二胺四乙酸二钠.3.1.10三羟甲基氨基甲烷，即Tris.3.1.11乙酸乙酯.3.1.13氢氧化钠溶液（1mol/L）：称取氢氧化钠（3.1.2）4g，用水溶解并稀释至100mL. 3.1.12磷酸二氢钠.3.1.14缓冲液：准确称取磷酸二氢钾（3.1.3）0.3g，磷酸氢二钠（3.1.4）1.5g，溶于约800mL水
中，充分混匀后用盐酸（3.1.5）或氢氧化钠溶液（3.1.13）调节pH至7.4，用水稀释至1000mL，混匀.4C保存，有效期三个月.
3.1.15展开液：准确称取磷酸二氢钾（3.1.3）2g，磷酸氢二钠（3.1.4）1.44g，氯化钠（3.1.6）8g，氯化钾（3.1.7）0.2g，三氮化钠（3.1.8）0.5g，乙二胺四乙酸二钠（3.1.9）1.0g溶于约500mL水中，充分混匀后用水稀释至1000mL.
3.1.16Tris缓冲液（pH9.0，1mol/L）：称取Tris（3.1.10）121.14g，溶于约700mL水中，充分混匀后加入盐酸（3.1.5）调试pH至9.0后用水定容至1000mL.
3.1.17Tris 缓冲液（pH9.0，10mmol/L）：精密量取1mol/LTris 缓冲液（3.1.16）1mL，用水稀释定容至100mL.
3.1.18磷酸二氢钠溶液（0.2mol/L）：称取磷酸二氢钠（3.1.12）24.0g，用水溶解并稀释至1000mL.
3.1.20磷酸盐缓冲液（pH7.4，0.2mol/L）：量取磷酸二氢钠溶液（3.1.18）19mL，加入81mL磷酸氢二钠溶液（3.1.19），混匀.
3.1.21磷酸盐缓冲液（pH7.4，10mmol/L）：精密量取0.2mol/L磷酸盐缓冲液（3.1.20）50mL，用 水稀释至1000mL.
3.2参考物质
克伦特罗、莱克多巴胺、沙丁胺醇参考物质的中文名称、英文名称、CAS登录号、分子式、相对分子量见表1，纯度≥97%.
表1克伦特罗、莱克多巴胺、沙丁胺醇参考物质的中文名称、英文名称、
CAS登录号、分子式、相对分子质量
序号 中文名称 英文名称 CAS登录号 分子式 相对分子质量1 克伦特罗 37148-27-9 C H CI N O 277.192 莱克多巴胺 Ractopamine 97825-25-7 CHNO 301.383 沙丁胺醇 Salbutamol 18559-94-9 C H NO 239.31
注：或等同可溯源物质.
3.3标准溶液配制
莱克多巴胺、沙丁胺醇标准储备液.-18℃保存，有效期一年.
3.3.1标准储备液：精密称取适量克伦特罗、莱克多巴胺、沙丁胺醇参考物质（3.2），分别置于100mL容量瓶中，用甲醇（3.1.1）溶解并稀释至刻度，摇匀，分别制成浓度为100ug/mL的克伦特罗、
3.3.2克伦特罗标准中间液（1μg/mL）：精密量取克伦特罗标准储备液（100μg/mL）（3.3.1）1mL置于100mL容量瓶中，用甲醇（3.1.1）稀释至刻度，摇匀，制成浓度为lμg/mL的克伦特罗标准中间液.临用新制.
3.3.3克伦特罗标准工作液（20ng/mL）：精密量取克伦特罗标准中间液（1μg/mL）（3.3.2）1mL，置于50mL容量瓶中，用甲醇（3.1.1）稀释至刻度，摇匀，制成浓度为20mg/mL的克伦特罗标准工作液.临用新制.
3.3.4莱克多巴胺标准中间液（1μg/mL）：精密量取莱克多巴胺标准储备液（100μg/mL）（3.3.1）lmL置于100mL容量瓶中，用甲醇（3.1.1）稀释至刻度，摇匀，制成浓度为lμg/mL的莱克多巴 胺标准中间液.临用新制.
3.3.5莱克多巴胺标准工作液（20ng/mL）：精密量取莱克多巴胺标准中间液（1g/mL）（3.3.4）1mL，置于50mL容量瓶中，用甲醇（3.1.1）稀释至刻度，摇匀，制成浓度为20ng/mL的莱克多巴胺标准工作液.临用新制.置于100mL容量瓶中，用甲醇（3.1.1）稀释至刻度，摇匀，制成浓度为1μg/mL的沙丁胺醇标准 中间液.临用新制.3.3.7沙丁胺醇标准工作液（20ng/mL）：精密量取沙丁胺醇标准中间液（1μg/mL）（3.3.6）1mL，置于50mL容量瓶中，用甲醇（3.1.1）稀释至刻度，摇匀，制成浓度为20ng/mL的沙丁胺醇标准工作液.临用新制.
3.4材料
3.4.1克伦特罗试剂盒/检测卡（条）：含胶体金试纸条及配套的试剂.3.4.2莱克多巴胺试剂盒/检测卡（条）：含胶体金试纸条及配套的试剂.3.4.3沙丁胺醇试剂盒/检测卡（条）：含胶体金试纸条及配套的试剂. 3.4.4固相萃取柱：丙烯酸系弱酸性阳离子交换柱.
4仅器和设备
4.1电子天平：感量为0.01g和0.0001g.
4.2组织粉碎机.
4.3水浴箱.
4.4离心机：转速≥4000r/min.
4.5移液器：10uL，100uL，1mL 5mL
4.6读数仪：产品配套可使用的检测仪器（可选）.
4.7固相萃取装置（可选）.
4.8其他产品说明书操作中需用的仪器.
4.9环境条件：温度10-40℃，湿度≤80%.
5分析步骤
5.1试样制备
取适量具有代表性样品的可食部分，充分粉碎混匀.
5.2试样提取和净化
称取适量试样，按照方法一（5.2.1）或方法二（5.2.2）提取步骤分别对空白试样、加标质控样品、待测样进行处理.
5.2.1方法一（隔水煮法）
称取粉碎混匀的样品5g（精确至0.0lg）于50mL离心管，置90C水溶中加热20min至离心管中可清晰看见有组织液渗透，4000r/min离心10min，将上清液转至另一离心管，重复离心操作
通过仪器对结果进行判读.
6.1.1无效
当质控线（C线）不显色时，无论检测线（T线）是否显色，均表示实验结果无效.
6.1.2阳性结果
若检测结果显示"”（阳性），表示试样中含有待测组分且其含量大于等于方法检测限.
6.1.3阴性结果
若检测结果显示""（阴性），表示试样中不含待测组分或其含量低于方法检测限.
6.2目视判定
通过对比质控线（C线）和检测线（T线）的颜色深浅进行结果判定.
6.2.1无效
当质控线（C线）不显色时，无论检测线（T线）是否显色，均表示实验结果无效.
6.2.2阳性结果
中含有待测组分且其含量高于方法检测限，判为阳性. 质控线（C线）显色，若检测线（T线）不出现或出现但颜色浅于质控线（C线），表示试样
6.2.3阴性结果
质控线（C线）显色，若检测线（T线）颜色深于或等于质控线（C线），表示试样中不含待测组分或其含量低于方法检测限，判为阴性.
A.试纸条
B.检测卡
