中华人民共和国出入境检验检疫行业标准
SN/T0868-2017代替SN/T0868-2000
出口甜叶菊中总糖含量的测定
Determination of steviosides in stevia leaf for export
中华人民共和国 国家质量监督检验检疫总局 发布
前言
本标准按照GB/T1.1-2009给出的规则起草.本标准代答SN/T0868-2000（进出口甜叶菊中总糖贰含量的测定方法比色法》.本标准与SN/T0868一2000相比，主要技术变化如下：--修改了标准名称； 一增加了高效液相色谱法作为本标准的第一法.本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口.本标准起草单位：中华人民共和国上海出人境检验检疫局.本标准主要起草人：曲菜、曹展、王传现、樊祥、顾莹、盛水刚、韩丽、王敏、邓晓军. 本标准所代誉标准的历次版本发布情况为：-SN/T0868-2000.
出口甜叶菊中总糖贰含量的测定
1范围
本标准规定了出口甜叶菊中总糖贰含量的测定方法.
本标准适用了甜叶菊中总糖式的检测和确证.
2规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的.凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件，凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括的修改单）适用于本文件.
GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法
第一法高效液相色谱法
3方法提要
试样中的总糖贰用水超声提取，用带有紫外检测器的液相色谱仪（波长200nm）测定，以色谐峰的保留时间定性，外标法定量，
4试剂和材料
除另有规定外，所用试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的一级水.
4.1乙晴：色谱纯.4.2乙晴-水溶液（7822.体积比）：取78mL的乙睛，加人22mL的水，混匀. 4.3标准物质：甜菊糖贰（CAS号57817-89-7）纯度≥98%.4.4标准物质：瑞鲍迪贰A（CAS号58543-16-1）纯度≥98%4.5标准物质：瑞鲍迪贰C（CAS号63550-99-2）纯度≥98%.4.6标准物质：杜克贰A（CAS号64432-06-0）纯度≥98%.4.8甜菊糖贰标准储备溶液：1.0mg/mL.准确称取甜菊糖贰标准物质10.0mg（精确至0.1mg）、用 4.7标准物质：甜菊双糖武（CAS号41093-60-1）纯度≥93%.4.2溶液溶解，并定容至10ml.所配制溶液于0℃~4C冰箱可保存6个月.4.9瑞鲍迪贰A标准储备溶液：1.0mg/ml..准确称取瑞鲍迪式A标准物质10.0mg（精确至0.1mg），用4.2溶液溶解，并定容至10mL.所配制溶液于0℃~4C冰箱可保存6个月.4.10瑞鲍迪贰C标准储备溶液：1.0mg/ml.准确称取瑞鲍迪式C标准物质10.0mg（精确至 0.1mg），用4.2溶液溶解，并定容至10mL.所配制溶液于0°C~4C冰箱可保存6个月.4.11杜克贰A标准储备溶液：1.0mg/ml.准确称取杜克贰A标准物质10.0mg（精确至0.1mg），用4.2溶液溶解，井定容至10mL.所配制溶液于0℃~4C冰箱可保存6个月.0.1mg），用4.2溶液溶解，并定容至10mL.所配制溶液于0“C~4C冰箱可保存6个月. 4.12甜菊双糖试标准储备溶液：1.0mg/ml.准确称取甜菊双糖贰标准物质10.0mg（精确至
SN/T 0868-2017
4.13总糖式混合标准中间溶液：1.0mg/ml，分别准确吸取甜萄糖贰、瑞鲍迪贰A、瑞鲍迪贰C、杜克贰A和甜菊双糖贰标准储备溶液2mL于10mL容量瓶中，配制成浓度为1.0mg/mL混合标准中间溶液.所配制溶液于0℃~4C冰箱可保存3个月.
4.14总糖试混合标准工作溶液：根据需要吸取适量混合标准中间溶液，用4.2溶液稀释成适当的混合标准工作溶液.混合标准工作溶液现用现配.
5仪器和设备
5.1高效液相色谱仪：配有二极管阵列检测器或紫外检测器.5.3分析天平：感量为0.1mg和0.01g 5.2液相色谱-串联质谱仪：配有电喷雾离子（ESI）源5.4涡旋混合器.5.5离心机：转速不低于4000r/mm5.6超声波清洗器.
6分析步骤
6.1试样处理
称取约0.5g试样（精确至0.001 ）于50mL离心管中.用水定容至50mL，振荡，超声提取15min，吸取500μL，加人500pL乙晴振荡混匀，15.000r/min离心5min.过022μm有机相滤膜，供HPLC 测定.
6.2液相色谱测定
6.2.1色谱参考条件
色谐参考条件如下：
6.2.2色谱测定
在仅器最佳工作条件下，用标准工作溶液分别进样，以峰面积为纵坐标，以标准工作落液浓度为横坐标，绘制标准工作曲线，用标准工作曲线对样品进行定量，样品溶液中待测物的响应值均应在仪器测定线性范围内.在上述色谱条件下，混合标准溶液色谱图参见附录A.
6.3液相色谱-质谱/质谱确证
6.3.1色谱参考条件
色谱参考条件如下：
a）色谱柱：氨基柱，150mm×4.6mm（内径）.5μm，或性能相当者.b）流动相：乙晴-水（7822，体积比）.
c）流速：0.5mL/min.d）进样量：5μL.
6.3.2质谱参考条件
质谱参考条件如下：
a）电离方式：电喷雾电离，负离子.b）扫描方式：选择反应监测（SRM）.c）雾化气、气帘气、辅助加热气、碰撞气均为高纯氮气及其他合适气体；使用前应调节各气体流量以使质诺灵敏度达到检测要求，参考质谱条件参见附录B中表B.1，五种甜菊糖贰标准溶液的 多反应监测（MRM）色谱图见附录C
6.3.3定性测定
品一致，定量测定时采用标准曲线法测定.定性时应当与浓度相当标准工作溶液的相对丰度一致，相对 按照液相色谱-质谱/质谱条件测定样品和标准工作溶液，如果检测的质量色谱峰保留时间与标准离子丰度允许偏差不超过表1的规定的范围，则可判定样品中存在对应的被测物.
5种甜菊糖式标准溶液的多反应监测色谱图参见附录C
表1液相色谱-串联质错法确证试验时相对离子丰度的最大允许偏差
相对离子丰度/% >50 >20~50 >10~20 10允许的相对偏差/% ±20 ±50
6.4空白试验
除不加试样外，均按以上操作步骤进行.
7结果计算和表述
试样中甜菊糖式的含量按式（1）进行计算
式中：
X 试样中甜菊糖式的含量，单位为毫克每百克（mg/100g）：v c 样液中甜菊糖贰的测定值，单位为微克每毫升（μg/mL）； 试样的最后定容体积，单位为毫升（mL）：试样质量，单位克（g）；1000 由μg/mL换算成mg/mL.的换算因子；100 由mg/g换算成mg/100g的换算因子.
甜菊糖式、瑞鲍迪式A、瑞鲍迪贰C、杜克式A和甜菊双糖贰各组分之和即为总糖式含量.
8定量限和回收率
8.1定量限
甜叶菊中的甜菊糖贰、瑞鲍迪贰A、瑞迪式C、杜克式A和甜菊双糖式的定量限为0.05%.
