中华人民共和国出入境检验检疫行业标准
SN/T 4785-2017
出口植物油中角鲨烯的测定
Determination of squalene in vegetable oil for export
中华人民共和国 国家质量监督检验检疫总局 发布
前言
本标准按照GB/T1.1-2009给出的规则起草.本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口.本标准主要起草人：韩丽、宋青、程甲、方晓明、邓晓军、王敏、郭德华、时逸吟、张秀芹. 本标准起草单位：中华人民共和国上海出入境检验检疫局.
出口植物油中角鲨烯的测定
1范围
本标准规定了植物油中角鲨烯测定的气相色诺-质谱法和高效液相色谐法，
本标准适用于植物油中角鲨烯的测定.
2规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的.凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件，凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括的作改单）适用于本文件.
GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法
3方法提要
试样中的角鲨烯用正已烷提取，经硅数柱净化，于 气相色谱-质错仪测定，外标法定量.
4试剂和材料
除另有规定外，所用试剂均为分析纯，水为符合GB/T6682规定的一级水.
4.1正已烷：液相色谱级.
4.2无水硫酸钠：使用前在650灼烧4h以上，冷却后储存在干燥密同容器中，备用.
4.3硅胶60（粒径0.063mm~0.200mm）：使用前在650C约烧5h以上，冷却后加人2%的水，混匀，转人至广口瓶中，备用.
4.4角鲨烯标准品：纯度≥99%，CAS号111-02
4.5角鲨烯标准溶液（1.00mg/mL）：准确称取0.0100g烯标准品（4.4）于10mL容量瓶中，用正己 烷定容至刻度，混匀.
4.6角鲨烯标准中间液I（100pg/mL）：准确吸取1.00mL角鲨烯标准溶液（4.5）于10mL容量瓶中，用正已烷定容至刻度，混匀.
4.7角鲨烯标准中间液Ⅱ（10pg/mL）：准确吸取1.00mL角鲨烯标准中间液1（4.6）于10mL容量瓶中，用正已烷定容至刻度，混匀
已烷定容，使标准工作溶液浓度分别为1.0μg/mL、2.0μg/mL、5.0μg/mL、10.0μg/ml、20.0μg/mL.
5仪器和设备
5.1气相色谱-质谱仪，配EI电离源.
SN/T 4785-2017
5.2天平：感量0.1mg和0.001g.5.3硅胶柱（内径10mm，长250mm，带活塞具砂芯板）：于柱中加入25mL正已烷，加3.5g硅胶（4.3），静置片刻，待硅胶沉积后，顶端再加人0.5cm高的无水硫酸钠，打开活塞，正已烷缓慢淋洗下来5.4旋转蒸发仪. 至高出顶端无水硫酸钠层约0.5cm时，关闭活塞，5.5涡旋振荡器.
6分析步骤
6.1提取/净化
称取0.5g植物油样（精确至0.001g）于50mL烧杯中，加人5mL正己烷，混匀，倒人硅胶柱中（5.3），用正已烷清洗烧杯2次，每次5mL，全部侧人柱中，打开活塞，收集洗脱液于250mL梨形瓶中.待正已烷液面略高出无水硫酸钠层时，加入85mL正己烷洗脱，弃去前10mL，收集剩余的洗脱液，在35C水搭中.用旋转蒸发仅旋转蒸发至干，用5.00mL正己烷溶解残渣，涡族混匀30s，供GC/MS测之内 定，如果样液浓度超过标准工作曲线范围，则将样液用正己烷稀释一定的倍数，使其浓度在线性范围
6.2仪器参数与测定条件
6.2.1气相色谱参考条件
6.2.1.1HP-5MS毛细管柱（30m×0.25mm×0.25μm），或相当者.6.2.1.3程序升温：200C保持1min，以25C/min升至300℃，保持5min. 6.2.1.2进样口温度：300℃.6.2.1.4载气：氮气，1.0mL/min.6.2.1.5进样方式：分流，分流比50：1.6.2.1.6进样体积：1.0μL
6.2.2质谱参考条件
6.2.2.1GC-MS接口温度：300C.6.2.2.2进样口温度：300℃6.2.2.3四极杆温度：150℃6.2.2.5EI离子源：70eV. 6.2.2.4离子源温度：230C.6.2.2.6选择性离子监测（SIM）模式：m/z69、81、95、137，定量离子为m/z69.
6.2.3气相色谱-质谱检测和确证
5.5min.角鲨烯标准品的色谱和质谱图参见附录A中的图A.1和图A.2.角签烯的定性离子（m/z）为 在上述气相色语-质谱条件下，对标准工作溶液和样液等体积参插进样测定，角鲨烯的保留时间为81、95、137.定量离子为m/z69，在扣除背景后的样品质谱图中，所选择的离子必须出现，高子丰度比变化范围见表1.
表1角鲨烯离子与相对丰度比
化合物 定性离子m/x 标准丰度比/% 允许相对偏高范围/%69 100 -角鲨始 81 62 1095 25 15137 20 15
7结果计算和表述
试样中角鲨烯含量用色谱数据处理机或按式（1）计算：
（1）.
式中：
X--试样中角篮烯含量，单位为毫克每千克（mg/kg）；V-样液定容体积，单位为毫升（mL）；c- 样液中角鲨烯的质量浓度：单位为微克每毫升（μg/mL）；试样质量，单位为克（g）：结果保留3位有效数字. f--稀释倍数.
8定量限和回收率
8.1定量限
本方法中角鲨烯测定的定量限为10mg/kg.
8.2回收率
植物油中添加10mg/kg~100mg/kg角鲨烯时，目收率的实验室数据为85.0%~106%.
添加水平为10mg/kg，回收率为85.0%~106%.添加水平为500mg/kg，回收率为89.8%~103%， 添加水平为100mg/kg，回收率为89.0%~100%.一添加水平为1000mg/kg，回收率为94.5%~103%.
第二法高效液相色谱法（HPLC）
9方法提要
试样中角鲨烯用正己烷提取，经硅胶柱净化，于高效液相色谱测定，外标法定量.
