中华人民共和国出入境检验检疫行业标准
毒麦检疫鉴定方法
Detection andidentification ofLolium temulentumL.
中华人民共和国 国家质量监督检验检疫总局 发布
前言
本标准按照GB/T1.1-2009给出的规则起草.
本标准代替SN/T1154-2002《植物检疫毒麦检疫鉴定方法》，本标准内容除了进一步修订完善原标准中毒麦形态特征鉴定内容，还增加了毒麦PCR的检测方法.
本标准由国家认证订可监督管理委员会提出并归口，
本标准起草单位：中华人民共和国福建出人境检验检疫局、中华人民共和国深圳出人境检验检疫局.
本标准主要起草人：郭琼霞、康林、黄振、陈冬美、于文涛、虞资、黄可辉.
本标准2002年首次发布，本次为第一次修订.
毒麦检疫鉴定方法
1范围
本标准规定了植物检疫中毒麦LoliumfemulentumL.的检疫鉴定方法.本标准适用于毒麦的检疫鉴定.
2术语和定义
下列术语和定义适用于本文件.
2.1
小穗spikelet
为禾本科花序的构成单位，是禾本科花序中的一个最小花额，每个小穗有一至数朵花，并连同基端由内、外颖片所组成.
2.2
禾本科的花（籽实）连同包被其外的内、外科.
2.3
颖glume
禾本科小穗基部苞片，共两枚，下面一枚为第一颖（外颖outerglume）.上面一枚为第二额（内颖inner glume).
2.4
禾本科小穗上花的苞片，共两枚，一枚为外科（lemma），一枚为内科（palea）.
禾本科小穗上的颖或外释先端伸长成刚毛状物.
2.7毒麦成分darnel ponents混杂于加工产品中毒麦籽实成分的含量.
在DNA聚合酶催化下，以母链DNA为模板，以特定引物为延伸起点，通过变性、退火、延伸等步骤，体外复制出与母链模板DNA互补的子链DNA的过程.
3基本信息
3.1名称
学名Lolium remulemum L异名Bromus temulentus（L）Bernh; Craepalia temulenta (L )Schrank;Festuca temulenta (I)Columbus &.J.P.Sm.
英文名bearded darnel darnel poison darnel poison rye grass
3.2分类地位
毒麦隶属禾本科Poaceae（Gramineae）、黑麦草属（LoliunL
3.3分布
危地马拉、秘鲁、乌拉主、委内瑞拉：北美湖：加拿大、美国；大洋洲：澳大利亚：亚洲：中国、印度：非洲：埃 起源于地中海周边地区，欧洲广布现已扩散到：南美洲：阿根廷、巴拿马、智利、厄瓜多尔、墨西哥、塞俄比亚等国家和地区.
3.4其他基本信息
lentumvar.aruense Bab.），其形态特征及危害性均与毒麦（hfemulentum L.）相似.因此本标准将长芒 毒麦有两个变种分别为：长芒毒麦（L.emtentumvar.tongtaristumParnell.）和田毒麦（L.temu-毒麦和田毒麦与毒麦一起定义
毒麦的近似种有：长芒毒麦、田毒麦、细穗毒麦（L.remram Schrank.）、波斯黑麦草（L.persicumBoiss&.Hoben.）、瑞士黑麦（L.rigidmGnud.）黑麦草（L.peremneL）多花黑麦草（L.muliflorumLam.）分种检索表参见附录A
4方法原理
料粮之中，随之调运和引种等而传插：毒凌及式变种的毒麦成分随植物原粮及饲料粮加工混杂于样品中.本标准以毒麦、长芒毒麦、田毒麦的小穗、小花（带释颖果）的形态特征进行判定；在毒麦、长芒毒麦、田毒麦的小穗、小花（带科颖果）的形态特征不明显、混杂于加工产品中毒麦、长芒毒麦、田毒麦籽实成分的含量，本标准以PCR检测结果进行判定.
5仪器、器具和试剂
5.1形态特征鉴定所用的仪器和器具
5.1.1仪器
体视显微镜（带目镜测微尺或镜台测微尺）、电动筛或套筛.
5.1.2器具
放大镜、解剖刀、解剖针、镊子、指形管、培养皿、白瓷盘、棉花、样品袋、标签、记录纸、标本瓶、标本
盒、防虫剂、樟脑精、干燥剂.
5.2PCR检测所用的仪器和试剂
5.2.1仪器
荧光PCR仪、高速冷冻离心机、UV/VIS分光光度计、电泳仪、凝胶图像分析仪、恒温水浴箱、生物安全柜、震荡器、制冰机、冰箱、超低温冰箱、移液器、电子天平.
5.2.2主要试剂
毒麦成分PCR检测试剂和材料参见附录B.
6实验室检验
6.1样品制备
将现场检疫抽取的送检样品充分混匀，制成平均样品 采用四分法，取平均样品的二分之一至四分之三（较少样品时）作为检验样品，其余的作为保存样品贴标签保存，称取并记录检验样品的质量.送检样品不足1.0kg的全检.
6.2样品检验
6.2.1过筛检查
根据检验样品个体的大小确定套筛的规格，按熙孔径从大到小依次套上套筛并加上筛底，将检验样品倒入最上层的套筛内，盖上筛盖，以回前 旋法过，或用电动振蓄，使样品充分分离，把过筛的筛上物和筛下物分别倒人白瓷盘内，用镊子挑拉杂草籽，并故置于培养Ⅲ内于体视显微镜下观察.检验样品个体大于黑麦草属的小穗和小花的主要检查筛下物：检验样品个体小于黑麦草属的小穗和小花的，主要检查筛上物.
6.2.2挑拣检查
羊毛、棉花等纤维类样品的实验室检测，需采用挑拣检验的方法进行.采用肉眼或借助扩大镜对纤维类样品的黑麦草属的小穗、小花（带释颖果）进行挑检.
6.2.3直接检测
对混杂于加工产品中毒麦、长芒毒麦、田毒麦籽实成分的含量，采取对制备的样品直接检测.
7形态鉴定
7.1形态鉴定方法
7.1.1目测鉴定
用肉眼或借助扩大镜将挑检的杂草籽实进行分类鉴定，挑取疑似黑麦草属的小穗、小花（带科颖果）.
