B 16 ICS 65.020
SN 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准
SN/T5012-2017
香蕉枯萎病菌生理小种检疫鉴定方法 Detection and identification of Fusarium oxysporum f. sp. cubense (E.F.Smith)Snyder&HansenRace
2017-11-07发布2018-06-01实施
中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局发布
SN/T5012-2017
前言
本标准按照GB/T1.1-2009给出的规则起草。
请注意本文件的某些内容可能涉及专利。
本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。
本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。
本标准起草单位：中华人民共和国南通出人境检验检疫局、华南农业大学、中华人民共和国江 苏出人境检验检疫局。
本标准主要起草人：肖杰文、李敏慧、徐宁、姜子德、禹海鑫、孙民琴、吴翠萍、李彬。
SN/T5012-2017
香蕉枯萎病菌生理小种检疫鉴定方法
1范围 本标准规定了进出境植物检疫中香蕉枯萎病菌生理小种的分子检测与鉴定方法。
本标准适用于香蕉种苗、组培苗及其他香蕉种质资源、商品用香蕉等中的香蕉枯菱病菌生理小 种的分子检测与鉴定。
2规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。
凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本 文件。
凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括的修改单）适用于本文件。
SN/T2122进出境植物及植物产品检疫抽样方法 SN/T2665香蕉枯菱病菌检疫鉴定方法 3基本信息 学名：Fusarium oxysporum f. sp, cubense(E.F.Smith）Snyder &Hansen.FoC. 分类地位：镰刀菌属（Fusarium），尖孢镰刀菌古巴专化型（Fusarium oxysporumf.sp.cubense）。
香蕉枯萎病菌的生理小种分类、寄主范围、为害症状和传播方式等其他信息参见附录A。
4原理 以香蕉枯萎病菌的危害症状、菌落的形态特征、寄主范围和分子检测结果等作为该病害的鉴定 依据。
5仪器和用具 5.1仪器 体视显微镜、生物显微镜（带显微照相设备）、PCR仪、超净工作台、生化培养箱、灭菌锅、制 冰机、紫外分光光度计、高速冷冻离心机、台式小型离心机、超低温冰箱、常规冰箱、旋涡震荡器、 电泳仪、凝胶成像系统。
5.2用具 烧杯、三角瓶、量筒、试管、培养Ⅲ、酒精灯、镊子、剪刀、载玻片、盖玻片、离心管、移液 器、移液器吸头、液氮罐。
SN/T5012-2017 6试剂和培养基
6.1试剂 PCR缓冲液、dNTPs（dATP、dTTP、dCTP、dGTP）、Taq DNA聚合酶、引物、葡萄糖、琼脂糖、 琼脂、无水乙醇、70%乙醇、0.1%升汞、灭菌水、40%甘油。
6.2培养基 马铃薯葡萄糖琼脂培养基（Potato DextroseAgar，简称PDA）。
具体配制方法见附录B。
7抽样与检查
7.1现场抽样 按照SN/T2122规定进行取样。
7.2现场检查 取样时应进行针对性检查，注意检查有无可疑病株。
若有可疑病株应将其挑出来，并送实验室 作进一步检验鉴定。
在以上针对性检查基础上，再按照相关标准规定进行取样。
8实检室检验
8.1症状检查 受侵染植株的症状参见附录A。
8.2病原菌的分离培养 按照SN/T2665中描述的方法进行分离培养。
8.3PCR检测 PCR检测方法见附录C。
9鉴定特征
9.1营养体及繁殖体形态 营养体及繁殖体形态特征参见SN/T2665。
9.2PCR检测 引物扩增有相应大小的产物带出现，可判定为阳性。
其中，尖孢镰刀菌通用引物的扩增片段大 小为729bp；1号生理小种特异性引物的扩增片段大小为354bp；2号生理小种特异性引物的扩增片段 大小为511bp：4号生理小种特异性引物的扩增片段大小为593bp。
10结果判定
如果分离物的各形态特征与9.1描述相吻合，且通用引物的PCR扩增结果为阳性，片段大小为...
