中华人民共和国出入境检验检疫行业标准
SN/T4747.3-2017
进出口食用动物大环内酯类药物残留 量的测定液相色谱-质谱/质谱法
Determination of macrolide residues of live animals for import and exportLC-MS/MS
中华人民共和国 国家质量监督检验检疫总局 发布
前言
本部分为SN/T4747系列标准的第3部分.本部分按照GB/T1.1-2009给出的规则起草.本部分由国家认证认可监督管理委员会提出并归口. 本部分起草单位：中华人民共和国天津出人境检验检疫局.本部分主要起草人：必捷波、李淑静、黄晨、王飞、张敏、许泓.
进出口食用动物大环内酯类药物残留 量的测定液相色谱-质谱/质谱法
1范围
吉他霉素、竹桃霉素的检测方法. SN/T4747的本部分规定了进出口食用动物中红霉素、螺旋霉素、替米考星、泰乐菌素、交沙霉素、
本部分适用于出人境检验检疫工作中牛、羊、猪、鸡血清和牛、猪、羊尿液中红霉素、螺旋霉素、替米考星、泰乐菌素、交沙霉素、吉他霉素、竹桃霉素的检测.
2规范性引用文件
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GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法
3试剂和材料
3.2乙睛：色谐纯，3.3叔丁基甲醚：分析纯.3.4磷酸氢二钠：分析纯.3.5甲醇-水（11）定容溶液：量取50mL甲醇（3.1）和50mL水混合均匀. 3.6标准物质：红霉素、螺旋霉素、替米考星、泰乐菌素、交沙霉素、吉他霉素、竹桃霉素和内标物质罗红霉素（见附录A），纯度≥95%.3.7标准储备液：0.1mg/mL，称取3.6所述各标准物质，用甲醇分别配成0.1mg/mL的标准储备溶3.8混合标准工作溶液：1.0μg/ml.吸取3.7所述各标准储备溶液1mL于100mL.容量瓶中，用甲 液，-15℃~20℃保存.醇定容至刻度，2℃~8℃保存.3.9内标储备溶液：0.1mg/mL.称取1.0mg罗红霉素于10mL容量瓶中.用甲醇溶解定容至刻度，混匀.-15℃~-20℃保存3.10内标工作溶液：1.0μg/mL，吸取1mL3.9所述内标储备液于100mL容量瓶中，用甲醇定容至 刻度.3.11饱和磷酸氢二钠溶液：称取22g磷酸氢二钠，溶于100mL水中.3.1215mL具塞离心管.3.130.22μm滤膜（有机系）.
3.1甲醇：色谱纯.
3.14水：为GB/T6682规定的一级水.
4仪器和设备
4.1液相色谱申联质谱仪：配有电喷雾离子源，
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4.2天平：感量分别为0.01g和0.0001g，4.3氮吹浓缩仪.
4.4高速冷冻离心机（最高转速可达30000g）.
5样品的采集与保存
5.1血样的采集
采集动物血样，待自然凝固后分离血清，分装于小管，加盖密封.
5.2尿样的采集
采集动物尿样，于4℃，30000g离心10min后，上清分装于小管，加盖密封.
5.3试样的保存
将分装后的血清、尿样于-15℃~-20℃保存
6测定步骤
6.1提取
6.1.1血清试样
称取约1g血清（精确至0.01g）于50mL高心管中加人50μL内标工作溶液（3.10）.再加人2mL叔丁基甲醚，振荡3min.4℃18750g离心5 min.取权丁基甲醚层置于15mL离心管中.用2mL叔丁基甲醚重复提取2次，合并提取液.40°℃水浴氮吹至近干.1.0mL甲醇-水定容液（3.5）复溶，过0.22pm滤膜.待测.
6.1.2尿样
称取约1g尿样（精确至0.01g），加人1ml饱和磷酸氢二钠溶液用以调节pH≥7.加人50μL内标工作溶液（3.10），再加人2mL极丁基甲醚，探荡3min.4℃C18750g离心5min，取叔丁基甲醚层置 于15mL离心管中，用叔丁基甲醚重复提取2次，合并提取液，40C土1C水浴氮吹至近干，以1.0mL定容液（3.5）复溶，过0.22μm滤膜，待测.
6.2基质工作曲线的配制
2.5pL、5.0pL、10gL、20μL、50μL混合标准工作溶液（3.8），依次加人相应试剂瓶中，再分别加人 取空白试样，不加内标工作溶液（3.10），按6.1.1或6.1.2进行提取，获得基质提取液，分别吸取50pL内标工作溶液（3.10），用基质提取液定容至1.0mL，获得2.5ng/mL、5ng/mL、10ng/mL、20ng/mL和50ng/mL的系列基质标准混合溶液.
6.3测定条件
6.3.1液相色谱参考条件
6.3.1.1色谱柱：ZorbaxSB-C.3.5μm，2.1×150mm，或相当者.6.3.1.2流速：0.3ml/min.6.3.1.3柱温箱湿度：25℃±1℃.6.3.1.4进样量：20pL
6.3.1.5流动相：0.15%甲酸水溶液（A）和乙晴（B）.梯度洗脱条件见表1.
表1梯度洗脱条件
时间/min 流动相A/% 流动相B/%0 0 0.5 95 95 5 53.0 40 603.1 5 956 5 956.1 12 5 595
6.3.2质谱条件
6.3.2.1离子源：电喷雾离子源.6.3.2.2扫描方式：正离子扫描.6.3.2.3检测方式：多反应监测.6.3.2.4电喷雾电压：5500V6.3.2.5气帘气压力：172.37kPa（25ps） 6.3.2.6辅助气压力：GS1：40psi；GS26.3.2.7离子源温度：600℃6.3.2.8定性离子对、定量离子对、去簇电压
表27种大环内酯类抗定性高子叉定量离子对、去族电压、碰撞能量
被测物名称 碰撞能量/V保留时间 734.5/5 于对（m ） 去 电压/V 29红毒素 5.0 34.5/1 41螺淀莓素 4 5 5343.4/Z1 121/9916 51 53泰乐菌素 5.2 42替米考星 4.7 869 6/174.2* 80 60828.4/174.1* 869 6/696.4 80 80 55 46交沙霜素 5 5 828.4/109 0 80 57吉他莓素 5.3 772.3/174.2 90 46772 3/215.2 688.4/158.2* 90 60 60 42竹桃霉素 4.9 688.4/544.3 60 42为定量离子对.
1）非商业性声明：所列质谱参数是在AP14000质谱仅上完成的，此处列出试验用仅器型号仅是为了提供参考， 并不涉及商业目的鼓励标准使用者尝试采用不同厂家或型号的仅器.
