中华人民共和国出入境检验检疫行业标准
SN/T4780-2017
出口食品腐败酵母菌 实时荧光PCR检测方法
Detection of spoilage yeasts in food for export-Real-time PCR method
中华人民共和国 国家质量监督检验检疫总局 发布
中华人民共和国出入境检验检疫
行业标准
前言
本标准按照GB/T1.1-2009给出的规则起草.
本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口.
本标准起草单位：中华人民共和国北京出人境检验检疫局、中华人民共和国上海出人境检验检疫局.
本标准主要起草人：付薄博、郭铮蕾、韩玥、徐娜、饶红、王传现、刘夏、李晓虹.
出口食品腐败酵母菌 实时荧光PCR检测方法
1范围
本标准规定了出口食品中鲁氏结合酵母菌（Zygosaccharomycesrou.xii）、酿酒酵母菌（Saccharo-myces cereuisiae）和酒香酵母菌（Brettanomyces spp.）的实时荧光PCR检测方法.
本标准适用于出口食品中鲁氏结合酵母菌、酿酒酵母菌和酒香酵母菌的实时荧光PCR检测.
2规范性引用文件
件.凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括的修改单）适用于本文件. 下列文件对于本文件的应用是必不可少的.凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文
GB4789.15食品安全国家标准食品微生物学检验 霉菌和酵母计数GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法GB19489实验室生物安全通用要求GB/T27403实验室质量控制规范食品分子生物学检测
3术语和定义
下列术语和定义适用于本文件.
3.1
腐败酵母菌Spoilageyeasts
腐败酵母菌是指在食品中生长而引起食品腐败变质的一类酵母菌.腐败酵母菌会分解食品的糖、胶质、淀粉和脂肪，产生二氧化碳、硫化物，或引起食物酸化，从而导致食品腐败.鲁氏结合酵母菌、酿酒酵母菌和酒香酵母菌均为重要的导致食品腐败的酵母菌.3.2
鲁氏结合酵母菌Zygosaccharomycesrouxii
在麦芽汁琼脂上菌落呈奶油色，稍有光泽，质地软而平滑，卵形或球形. 鲁氏结合酵母菌（Zygosaccharomycesrou.rii）属于擦孢酵母科，鲁氏结合酵母属.鲁氏结合酵母菌
注：鲁氏结合酵母菌是最常见的嗜高渗透压酵母菌，既是主要传统发酵食品的生产菌，又是引起某些低水分活度食品及原料的腐败菌，如：鲁氏结合酵母菌是生产酱油、日本味增和泰国发酵鱼制品等发酵制品的重要菌种，在果汁、果酱、软饮料、沙拉酱和测味番茄酱等中则是腐败菌.
3.3
酿酒酵母菌（Saccharomycescerevisiae）属于酵母菌科，酿酒酵母菌属.单细胞，卵圆形或球形，具细胞壁、细胞质膜、细胞核、液孢、线粒体.细胞大小为2.5μm~10μm×4.5μm~21μm.酿酒酵母菌在孟加拉红培养基上光滑、湿润，呈红色、粉红或白色蜡样菌落，常带黏性.酿酒酵母菌又称面包酵母或者出芽酵母，常常存在于蔬果汁饮料中，从而引起饮料的腐败.
SN/T 4780-2017
3.4
酒香酵母菌Brettanomycesspp.
酒香酵母菌（Breltanomycesspp.）属于隐球酵母菌科，酒香酵母菌属.酒香酵母菌的菌落特征为乳白色、圆形、中央凸起、边缘扁平、表面湿润光泽、粘稠易挑起，有轻微的酱香味，主要以出芽方式繁殖.
注：酒香醇母菌属中的布鲁塞尔酒香酵母菌（Brelaomycesbruzellensis）会引葡萄酒风味劣变.在酿造葡萄酒过程 中，酒香母菌在酒体中产生的4-乙基苯酪（4-Ethylphenol，4-EP）和4-乙基愈创木酚（4-Ethyiguaiacol.4-EG），能产生一种典型的“马概味”不良风味.在低浓度时，这些物质可以对葡萄酒的香气产生有利的影响，增加许多特别的风味，但浓度一旦变高，就会产生不愉快的气味，降低葡萄酒的香气和口感，影响葡萄酒的经济价值.
4缩略语
下列缩略语适用于本文件.
PCR：聚合酶链式反应（polymerase chainreaction）Ct值：循环阔值（Cyclethreshold） DNA：脱氧核糖核酸（deoxyribonuleic acid）FAM：6-鞍基荧光素（6-carboxy-fluorescein）TAMRA：6-胶基四甲基罗丹明（Tetramethylrhodamin）MGB：小沟结合物探针（Minor Groove Binder） BHQ：黑洞淬灭基团（BlackHoleQuencher）
5生物安全要求及防污染措施
5.1检测工作中的个人防护按照GB19489. 5.2使用过的实验用品应遵照GB19489对废弃物的处理要求进行无害化处理.5.3检测过程中防止交叉污染的措施按照GB/T27403执行.
6仪器和设备
6.1荧光定量PCR仪，6.2高速台式离心机：最高离心力不低于15000×g.6.3生物安全柜或超净工作台.6.5恒温培养箱. 6.6涡旋振荡器.6.8高压灭菌锅.6.9接种环.6.10移液器及对应吸头：10μL100pL200μL、1000pl.
6.7紫外灭菌灯.
6.11PCR反应管.
7试剂
除另有规定外，试剂为分析纯或生化试剂.实验用水应符合GB/T6682中一级水的规格.试2
