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T/LT1A31-2025
动物种属鉴定高通量测序技术规范
Technical specifications for animal species identification based on high-throughputsequencing technology
深圳市生命科技产学研资联盟 发布
目次
前言 II1范围.2规范性引用文件.3术语和定义.4缩略语. N5基本要求.5.1实验室要求 5.2设施设备要求.. 25.3人员要求.6鉴定流程.6.1流程要求. 6.2样本采集.6.3DNA提取 3 36.4高通量测序6.5数据分析 46.6鉴定意见. 6.7鉴定意见文书. 6参考文献
前言
本文件按照GB/T1.1一2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定
请注意本文件的某些内容可能涉及专利，本文件的发布机构不承担识别专利的责任.
本文件由深圳华大法医科技有限公司提出.
本文件由深圳市生命科技产学研资联盟归口.
本文件起草单位：深圳华大法医科技有限公司、东北林业大学、公安部物证鉴定中心、南方医科大学、中国政法大学、辽宁省公安厅、浙江省公安厅、陕西省公安厅、青海省公安厅、天津市公安局、上海市公安局、北京市公安局、黑龙江省公安厅、内蒙古自治区公安厅、山西省公安厅、河南省公安厅、 湖北省公安厅、广东华大法医物证司法鉴定所、北京华大方瑞鉴定技术有限公司司法鉴定中心、台州市公安局、深圳海关细私局、中国海关科学技术研究中心、兰州市公安局、柳州市公安局、广西壮族自治区公安厅、丽水市公安局、深圳华大基因细胞科技有限责任公司、杭州华大赛迪斯逆科技有限责任公 司、深圳市生命科技产学研资联盟、深圳华大基因科技有限公司.
本文件主要起草人：程莹莹、徐艳春、郭小森、张颖、陈玲、袁丽、邵武、郝宏蕾、赵杰、鲁斌、康恒亮、彭微、李达、牛宝东、高勇、骆继怀、张秀、陈祖聪、陈国林、邓超慧、刘雪媛、赵雪宇、郑 沈悦生、高昀露、赵东、黄飞、聂同钢、杨帆、刘金杰、马云龙、徐颖、吴轩、郭利红、王锟、刘佳、海兵、李陶莎、尹烨.
动物种属鉴定高通量测序技术规范
1范围
文库构建、测序及测序数据分析的方法、相应的质量评估方法及鉴定意见文书书写规范. 本文件规定了基于高通量测序技术的动物种属鉴定的技术要求，描述了鉴定的基本要求、样本DNA
本文件适用于各领域中单一种属样品和混合种属样品的动物源性成分鉴别的高通量测序定性检测.
2规范性引用文件
仅该日期对应的版本适用于本文件：不注日期的引用文件，其最新版本（包括的修改单）适用于本 下列文件中的内容通过文中的规范性引用面构成本文件必不可少的条款.其中，注日期的引用文件，文件.
GB/T30989高通量基因测序技术规程 GB/Z31233分立个体类产品随机抽样实施指南GB/T43650野生动物及其制品DNA物种鉴定技术规程SF/T0069法医物证鉴定实验室管理规范 SF/T0136法医学非人源生物检材种属鉴定技术规范CNAS-CL08司法鉴定/法庭科学机构能力认可准则
3术语和定义
GB/T30989、GB/Z31233和SF/T0136界定的以及下列术语和定义适用于本文件.
动物种属animal species
被划分为同一类群的动物个体的总称，是由具有生殖隔离能力的种群进行自然繁殖产生的个体组成的 动物的基本分类单元，即具有统一且稳定的形态和遗传特征以及占有一定自然分布区的动物类群，群体.
3.2
DNA 种属鉴定 DNA species identification
基于DNA分析方法甄别种属特异性DNA序列，实现对动物进行分类地位（科、属、种）的认定.
[来源：SF/T0136-2023，3.1，有修改]
3.3
DNA宏条形码 DNAmetabarcoding
种鉴别和生物多样性评估. 一种通过高通量测序解析单个或混合样本的一个或多个DNA条形码的分子生物学技术，常用于物
3. 4
DNA文库DNAlibrary
带有特定接头序列的双链待测DNA片段分子集合.
公共数据库中收录的与物种对应的DNA条形码序列.
3.6
操作分类单元operationaltaxonomic units，OTU 在系统发生学研究或群体遗传学研究中，为了便于进行分析，人为给某一个分类单元（如品系、种、属、分组等）设置的同一标志.
3.7
聚类分析 clustering analysis
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将具有较高相似性的测序序列进行分组，以OTU（3.6）的形式呈现不同的组.
一致度identity
OTU（3.6）与DNA条形码参考序列（3.5）比对部分DNA序列的一致程度，用于评估比对序列的相似性程度.
4缩略语
下列缩略语适用于本文件.
BOLD：生命条形码数据系统（The Barcode of Life Data System）COl:细胞色素C氧化酶亚基1基因（CytochromeCOxidascSubunit1）DNA：脱氧核糖核苷酸（DeoxyribonucleicAcid） cyrb：细胞色素b基因（Cytochrome b）NCBl：美国国立生物技术信息中心（National Center for Biotechnology Information）OTU：操作分类单元（OperationalTaxonomicUnits） PCR：聚合酶链式反应（Polymerase ChainReaction）12S:12S核糖体RNA基因（12S ribosomal RNA，12S rRNA）16S:16S核糖体RNA基因（16S ribosomal RNA，16S rRNA)
5基本要求
5.1实验室要求
从事动物种属鉴定的实验室应符合以下要求：
a)实验室环境条件满足GB/T30989要求：b）实验室以及样本管理、设备管理、质量管理等应符合SF/T0069的规定： c)建立样本的运输、接收、处置、保护、存储、保留和清理的制度，能对接收、内部传递、处置、保留、返还和清理等过程进行记录，确保记录的完整性和可追溯性.
5.2设施设备要求
5.2.1主要仪器
从事动物种属鉴定所需的主要仪器（包括但不限于）：
a）高速离心机：大于10 000r/min： b）移液器套装：常见量程范围为0.1~1000uL：c)低温冰箱：4°℃，-20°℃，-80°℃；d）涡旋振荡混合仪： e) 超净工作台：生物安全柜：g） 恒温孵育仪： 核酸精准定量仪器：h) i) DNA扩增PCR仪：k）高通量测序仪： j) 磁力架：1) 数据分析服务器.
5.2.2主要试剂
从事动物种属鉴定所需的主要试剂包括但不限于：
b）双链DNA定量试剂盒： a)无水乙醇：c）高通量测序文库构建试剂：
