T/NMRJ 041-2026
乳制品中糖醇的测定液相色谱法
Determination of sugar alcohols in dairy products-Liquid chromatography
内蒙古认证和检验检测协会发布
前言
本文件按照GB/T1.1-2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起草.
请注意本文件某些内容可能涉及专利.本文件的发布机构不承担识别专利的责任.
本文件由内蒙古自治区检验检测标准化技术委员会（SAM/TC61）归口.
本文件起草单位：内蒙古自治区产品质量检验研究院、内蒙古自治区食品质量安全检验检测科学研究院、内蒙古蒙牛乳业（集团）股份有限公司、准格尔旗市场监管检验检测信息中心、锡林郭勒盟检验 检测中心、内蒙古自治区特种设备检验研究院巴彦淳尔分院.
本文件主要起草人：高杨、冯淑艳、鲁丽花、左国强、黄文强、张宏博、和奕含、高青云、梁敏、贾爱媛、张冉昊、叶杉杉、汤济航、乔奇、金箫、张琳、董立雅、郝晖、陈姝君、韩雪、王涛、刘璐、 樊松柯、赵柏全、包明玥、王力群、卢军.
乳制品中糖醇的测定液相色谱法
1范围
本文件规定了乳制品中赤藓糖醇、木糖醇、山梨糖醇、甘露醇、麦芽糖醇、乳糖醇的液相色谱测定方法.
本文件适用于液体乳中赤藓糖醇、木糖醇、山梨糖醇、甘露醇、麦芽糖醇、乳糖醇的测定及乳粉中赤藓糖醇、木糖醇、山梨糖醇、甘露醇的测定.
2规范性引用文件
仅该日期对应的版本适用于本文件：不注日期的引用文件，其最新版本（包括的修改单）适用于本 下列文件中的内容通过文中的规范性引用面构成本文件必不可少的条款.其中，注日期的引用文件，文件.
GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法
3术语和定义
本文件没有需要界定的术语和定义.
4原理
试样经三氯乙酸溶液提取，沉淀蛋白质后离心，乙躺稀释，上清液进高效液相色谱仪，经氨基色谱柱分离，蒸发光散射检测器检测，根据色谱峰的保留时间定性，外标法定量.
5试剂和材料
除非另有说明，本方法所用试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的一级水.
5.1试剂
5.1.1乙晴（CH;CN）：色谱纯.5.1.3冰乙酸（CH;COOH） 5.1.2三氯乙酸（CCl;COOH）
5.2试剂配制
5.2.1三氯乙酸溶液（2.5g/L）：称取2.5g三氯乙酸，用水溶解并定容至1000mL，摇匀.5.2.2乙酸水溶液（0.05%）：吸取冰乙酸0.5mL，加水定容至1000mL.5.2.3亚铁氰化钾溶液（92g/L）：称取106g亚铁氰化钾，加入适量水溶解，用水定容至1000mL. 5.2.4乙酸锌溶液（183g/L)：称取220g乙酸锌溶于少量水中，加入30mL冰乙酸，用水定容至1000mL.
5.3标准品
5.3.1本糖醇（CsHzOs，CAS号：87-99-0），纯度≥99%，或经国家认证并授予标准物质证书的标准物质.5.3.2山梨醇（CgH4Os，CAS号：50-70-4），纯度≥99%，或经国家认证并授予标准物质证书的标 准物质.5.3.3麦芽糖醇（CHO，CAS号：585-88-6），纯度≥99%，或经国家认证并授予标准物质证书5.3.4赤藓糖醇（C4HuO4，CAS号：149-32-6），纯度≥99%，或经国家认证并授予标准物质证书的 的标准物质.标准物质.
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5.3.5乳糖醇（CzH4O，CAS号：585-86-4），纯度≥99%，或经国家认证并授予标准物质证书的标准物质.
5.3.6甘露醇（CgH4Os，CAS号：69-65-8），纯度≥99%，或经国家认证并授予标准物质证书的标 准物质.
5.4标准溶液配置
5.4.1标准储备液（10mg/mL）：分别准确取100mg（精准至0.0001g）标准品，用水溶解并用10mL容量瓶定容，摇匀，4℃保存，有效期1个月.
5.4.2标准工作液：分别吸取适量标准储备液，用水配置成质量浓度为0.05mg/mL、0.10mg/mL、0.20 mg/mL、0.30mg/mL、0.50mg/mL的混合系列标准工作液，临用现配.
5.5材料
微孔滤膜：0.22μm，有机相.
6仪器和设备
6.1高效液相色谱仪：具有蒸发光散射检测器.6.2旋涡混合器.6.3分析天平：感量为0.0001g、0.01g.6.4高速离心机：转速≥4000r/min.6.5超声波清洗器：工作频率40kHz，功率500W.
7分析步骤
7.1试样制备及前处理
7.1.1液体乳：准确称取1g液体乳试样（精确到0.001g）于10mL离心管中，加入三氯乙酸溶液（5.2.1）并用定容至10mL，涡旋混匀，超声提取15min，以8000r/min的转速离心5min，吸取5.0mL上清液于10mL离心管中，加入5.0mL乙晴，以8000r/min的转速离心5min，取上清液经0.22μm有机 滤膜过滤后，滤液作为试样溶液备用.
7.1.2乳粉：准确称取约0.5g奶粉试样（精确至0.0001g）于10mL离心管中，加入5mL三氯乙酸溶液（5.2.4）沉淀蛋白，用三氯乙酸溶液（5.2.1）定容至10mL，然后以8000r/min的转速离心5min， 液（5.2.1），涡旋混匀，超声提取15min，分别加入1mL亚铁氰化钾溶液（5.2.3）和1mL乙酸锌溶吸取5.0mL上清液于10mL离心管中，加入5.0mL乙，以8000rmin的转速离心5min，取上清液经0.22um有机滤膜过滤后，滤液作为试样溶液备用.
7.2仪器参考条件
7.2.2流速：0.3 mL/min. 7.2.1色谱柱：HILIC-Z，2.1×100mm，1.9μm，或相当者.7.2.3柱温：30℃.7.2.4进样量：3μL.7.2.6气体流量：0.9L/min. 7.2.5蒸发温度：65.0℃.7.2.7流动相：A相为0.05%乙酸水，B相为乙睛.梯度洗脱程序见表1.
表1流动相洗脱参考梯度
时间（min） 流动相A/% 5 流动相B/% 950.0 1.0 5 9514.0 16 84
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时间（min） 流动相A/% 流动相 B/%25.0 5 95
7.3标准曲线制作
将系列标准工作液分别注入液相色谱仪，在7.2所述色谱条件下测定相应标准溶液的响应值（峰面积），以标准工作溶液浓度的以10为底的对数值为横坐标，以响应值（峰面积）的以10为底的对数值为 纵坐标，制作标准曲线.各糖醇标准溶液的色谱图见附录A中图A.1.
7.4试样溶液的测定
将试样溶液注入高效液相色谱仪中.保留时间定性，峰面积定量，根据对数工作曲线得到试样溶液中各糖醇的浓度.
7.5空白试验
除不加试样外，均按上述测定步骤进行.
8分析结果的表述
试样中各糖醇的含量按式（1）计算：
式中：
f稀释倍数： m-试样的质量，单位为克（g）.1000换算系数
X试样中赤藓糖醇、木糖醇、山梨糖醇、甘露醇、麦芽糖醇、乳糖醇的含量，g/100g：
c-由标准曲线获得的试样溶液中各糖醇的浓度，单位为毫克每升（mg/mL）：
V-试样溶液的定容体积，单位为毫升（mL）：
计算结果保留三位有效数字.
9精密度
计算结果在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的10%.
10其他
当液体乳称样量为1g时，本方法中六种糖醇的定量限为0.2g/100g. 当乳粉称样量为0.5g时，本方法中四种糖醇的定量限为0.4g/100g.
