GB/T 14926-45-2001
前旱
本标准规定了犬布鲁杆菌的检测方法。
由于犬的布鲁杆菌具有”S"型和”R"型抗原，本标准写明了 两种抗原的检测方法及判定标准。
本标准由中华人民共和国科学技术部提出并归口。
本标准起草单位：中国实验动物学会。
本标准主要起草人：黄韧。
中华人民共和国国家标准
实验动物布鲁杆菌检测方法GB/T 14926.45-2001 Laboratory animalMethod for examination of Brucella sp.
1范围 本标准规定了实验动物布鲁杆菌的检测方法。
本标准适用于犬布鲁杆菌的检测。
2引用标准 下列标准所包含的条文，通过在本标准中引用面构成为本标准的条文，本标准出版时，所示版本均 为有效。
标准都会被修订，使用本标准的各方应探讨使用下列标准最新版本的可能性。
GB/T14926.42-2001实验动物细菌学检渊标本采集 GB/T14926.43-2001实验动物细菌学检测染色法、培养基和试剂 3原理 “S（光滑）型”和"R（粗糙）型”布鲁杆菌是犬必需排除的病原菌。
从布鲁杆菌标准抗原（R型和S型） 与犬血清试管凝集效价，可以判定犬是否感染布鲁杆菌。
4主要设备和材料 普通恒温培养箱 5培养基及试剂 5.1布鲁杆菌标准抗原（R型和S型）。
5.2布鲁杆菌标准阴性、阳性血清。
5.3生理盐水.
中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局2001-08-29批准2002-05-01实施
I
GB/T 14926.45-2001 6检测程序
血清
倍比稀释 加入标准抗原37C温箱18~24h后室温费置2h 结果判定
凝集不凝集
“s”抗原"s"抗原附性 效价≥50附性效价<50可疑 “R"抗“R”抗原 效价≥160附性效价<160可疑
结果报告
7操作步骤 7.1采样 取血、分离血清。
7.2"S"抗原试管集试验 7.2.1血清稀释参照表1进行。
取小试管5只，置于试管架上，标明编号。
第1管内加人生理盐水0.84mL，第2~5管加人 0.5ml.取待检血清0.16ml.加人第1管内，混匀，取0.5ml.加入第2管内，混匀，取0.5ml.加人第 3管内-如此稀释至第5管，弃去0.5ml。
此时各管血清稀释倍数为1：6.25.1：12.5.1：25.1：50， 1 : 100。
7.2.2加入抗原 将各管加人标准抗原0.5mL，混匀，此时各管血清稀释倍数为1：12.5，1125，1：50，1：100， 1：200。
具体操作见表1。
置37C温箱18~24h，取出后室温静置2h，观察结果。
GB/T 14926.45-2001 表1布鲁杆菌"S"抗原试管凝集试验操作方法 试管编号12345 生理垫水，ml0.840,50,50.50.5 待检应济.ml0.160.5,0.5,0.5/0.5弃去0.5 标准抗原，ml0.50.50.50.50.5 稀释度1/12. 51/251/501/1001/200 7.3“R"抗原试管凝集试验 7.3.1血清稀释参照表2进行。
取小试管5只，置于试管架上，标明编号。
第1管内加人生理盐水0.95mL.第2~5管加入 0.5mL。
取待检血清0.05ml.加人第1管内，混匀，取0.5ml.加人第2管内，混匀，取0.5mL.加入第 3管内如此稀释至第5管，弃去0.5mL。
此时各管血清稀释倍数为1：20.1：40，1：80，1：160， 1:320. 7.3.2加入抗原 将各管加入抗原0.5mL，混匀，此时各管血清稀释倍数为1+40.1+80，1：160，1：320，1：640 具体操作见表2，置37C温箱18~24h，取出后室温静置2h，观察结果。
表2布鲁杆菌"R"抗原试管摄集试验操作方法 试管编号12345 生理垫水，ml0,950.50.50,50.5 待检血清，mL0.05→0.5/0.50.50.5弃去0.5 标准抗原，ml0.50.50.50.50.5 稽释度1/401/801/1601/3201/640 7.4对照管的制作 每次试验须作三种对照： 阴性血清对照：阴性血清的稀释和加抗原的方法与待检血清相同。
阳性血清对照：阳性血清须稀释到原有的满度，加抗原的方法与待检血清相同。
抗原对照：试验中所用的适当稀释抗原0.5ml.，加0.5mL.石炭酸生理盐水。
7.5比浊管的配制 每次试验须配制比浊管作为判定清亮程度（凝集反应程度）的依据。
配制方法：取本次试验用的抗原稀释液，加入等量的0.5%生理盐水作倍比稀释，然后按表3配制 比浊管。
表3比注管配制 试管号12345 抗原稀释液，ml0, 000, 250,500.751, 00 生理垫水，ml1,000.750,500.250,00 清亮度.%1007550250 集度标记++++++++++ 7.6结果判定 结果判定标准如下： 十十十十：液体完全透明，管底出现大片的伞状沉淀。
十十十：液体几乎透明，管底出现明显的伞状沉淀。
十十：液体不甚透明，管底出现片状沉淀，振荡时易碎成小絮片状。
十：液体不透明，管底有松散沉淀。
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