中华人民共和国国家标准
GB/T 19684-2005
Determination of chlortetracycline in feeds-High performance liquidchromatography
中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局 中国国家标准化管理委员会 发布
前言
技术发展水平研究制定的.考虑微生物法和浊度分析法操作时间长，分析难度大，因此采用了高效液相 本标准是在参阅了美国公职分析化学家协会（AOAC）方法及国内外大量文献的基础上，根据我国色谱法（HPLC）.
本标准由中华人民共和国农业部提出.
本标准由全国饲料工业标准化技术委员会归口.
本标准参加起草单位：国家饲料工程技术研究中心、国家饲料质量监督检验中心（北京）.
本标准起草人：张丽英、李德发、杨文军、王燕华、常碧影、李兰.
饲料中金霉素的测定高效液相色谱法
1范围
本标准规定了以高效液相色谱（HPLC）测定饲料中金霉素的方法.
4 mg/kg.
2规范性引用文件
下列文件中的条款通过在本标准的引用而成为本标准的条款.凡是注日期的引用文件，其随后所究是否可使用这些文件的最新版本，凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准. 有的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然面，鼓励根据本标准达成协议的各方研
GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法GB/T14699.1饲料采样
3方法原理
测器检测，外标法定量分析.
4试剂和材料
本标准所用试剂，除特别注明外，均为分析纯.水为蒸馏水，色谱用水为去离子水，符合GB/T6682用水的规定.
4.1氢氧化钠溶液：400g/L.
4.2乙二酸（草酸）溶液：[c（1/2H:CO）=0.01mol/L].
4.5流动相：乙二酸溶液（4.2）乙晴（色谱纯）甲醇（色谱纯）=1032.
4.6.1金霉素标准储备液准确称取金霉素标准品0.01290g（含量大于96.9%，储存于硅胶干燥器 中），精确至0.1mg，置于50mL容量瓶中，用提取液（4.4）溶解并定容至刻度，摇匀，其浓度为250g/L，贮于4C~6C冰箱中，有效期为一周.
4.6.2金霉素标准工作液准确移取4mL金霉素标准储备液（4.6.1）于10mL容量瓶中，用超纯水稀释至刻度，摇匀，其浓度为100g/L，现用现配.
5仪器、设备
5.1离心机：3000r/min.5.2pH计：精度0.01mV.5.3恒温振荡器：300r/min. 5.4微孔滤膜（孔径0.45um）.5.5分析天平：感量0.1mg.5.6分析天平：感量0.01mg.
GB/T 19684-2005
5.7高效液相色谱仪.
6试样的选取和制备
按GB/T14699.1选取有代表性样品200g~500g.用四分法缩至100g，粉碎通过0.45mm孔径筛，充分混匀，贮于磨口瓶中备用.
7分析步骤
7.1称取试样1g~10g（金霉素含量大于等于40mg/kg），准确至0.1mg，置于具塞锥形瓶中，加人为稀释倍数），盖紧塞子，置恒温震荡器（5.3）中（振荡速度110r/min）振荡30min.
7.2将提取液（7.1）倒入离心管，3000r/min离心15min.
7.3取离心上清液用滤膜（5.4）过滤，滤液作为试样溶液.
7.4HPLC测定参数的设定： 分析柱C：柱长150mm，内径4.6mm，粒度5m（或类似分析柱）；柱湿：室温：检测器：紫外检测器，检测波长375nm；进样量：10uL~20L 流动相速度：1.0mL/min;
7.5定量测定：采用多点外标法，根据浓度与峰面积的线性回归方程计算金霉素的含量（g/L).
8测定结果的计算
8.1每千克试样中所含金霉素的质量X（mg）按式（1）计算：
式中：
X-每千克试样中所含金霉素的质量，单位为毫克（mg）：-试样质量，单位为克（g）：
m--HPLC试样色谱峰对应的金霉素质量，单位为微克（ug）；"稀释倍数.
8.2测定结果用平行样测定的算术平均值表示，保留至小数点后1位，
9允许差
两个平行测定结果的相对偏差不大于7%.
