中华人民共和国国家标准
GB/T 20944.1-2007
Textiles-Evaluation for antibacterial activity-Part 1:Agar diffusion plate method
中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局 中国国家标准化管理委员会 发布
前言
GB/T20944《纺织品抗菌性能的评价》包括如下3个部分：一第2部分：吸收法； 一第1部分：琼脂平皿扩散法；一第3部分：振荡法.本部分为GB/T20944的第1部分.本部分由中国纺织工业协会提出.本部分由全国纺织品标准化技术委员会基础分会（SAC/TC209/SC1）归口.本部分由国家棉纺织产品质量监督检验中心、北京洁尔爽高科技有限公司、深圳市康益保健用品有限公司、江苏AB集团有限责任公司、纺织工业标准化研究所负责起草.本部分主要起草人：徐路、商成杰、张华、装茹冰.
纺织品抗菌性能的评价 第1部分：琼脂平血扩散法
1范围
GB/T20944的本部分规定了采用琼脂平Ⅲ扩散法测定纺织品抗菌性能的定性试验和评价方法.本部分适用于机织物、针织物、非织造织物和其他平面织物.纤维、纱线等可参照执行.本部分不适用于抗菌剂在试验琼脂上完全不扩散的试样，也不适用于抗菌剂与琼脂起反应的试样.本部分不涉及抗菌产品安全性的评价.
2术语和定义
下列术语和定文适用于GB/T20944的本部分.
2. 1
抗菌性能antibacterial activity
产品所具有的抑制细菌繁殖的性能.
2. 2
抑菌带zone of bacterial inhibition
琼脂培养基表面与试样接触的边界处无细菌繁殖的区域，即试样边缘附近没有细菌的环带.
3安全预防措施
本方法需要使用细菌，并且具有促进细菌繁殖的条件，所以应在规定的试验环境下由经过培训的人员进行试验.
4原理
平Ⅲ内注入两层琼脂培养基，下层为无菌培养基，上层为接种培养基，试样放在两层培养基上，培养一定时间后，根据培养基和试样接触处细菌繁殖的程度，定性评定试样的抗菌性能.
5设备、培养基和试剂
5.1设备
5.1.1分光光度计，检测波长660nm.5.1.2恒温培养箱：温度能保持在37C士2C.5.1.3水浴锅：温度能保持在45C土2C.5.1.4恒温调速摇瓶柜， 5.1.5冰箱：温度能保持在2C~8C.5.1.6高压灭菌锅：温度能保持在121C，压力能保持在103kPa.5.1.7显微镜：放大倍数20倍，下光源照明.5.1.8平Ⅲ：玻璃或聚苯乙烯制，直径90mm~100mm或55mm~60mm. 5.1.9微量移液器，最小刻度5uL.5.1.10二级生物安全柜.5.1.11试管、烧瓶等实验室常用器具.
5.2培养基和试剂
5.2.1试剂
析级的纯水，可用蒸馏、离子交换或用反渗装置过滤等方法制取，应无毒和无抑菌物质. 试验所用试剂应是分析纯的或适用于微生物试验用的.试验用水应是用于制备微生物培养基的分
5.2.2培养基
营养肉汤和琼脂培养基采用下列组分，如有偏离应在试验报告中说明.
a）营养肉汤植物蛋白陈 胰蛋白陈 5g 15 g氯化钠 5g燕馏水 （最终定容至）1000mL
灭菌后，pH值为7.2士0.2.
b）琼脂培养基
胰蛋白陈 15 g植物蛋白陈 5g氯化钠 5g（最终定容至）1000mL 15 g蒸馏水
灭菌后，pH值为7.2士0.2.
注1：建议使用现有商业化的脱水原料制备培养基.并严格按照相关产品制造商的使用说明操作.注2：营养肉和琼脂培养基配制后如不立即使用.5℃~10℃保存.配制超过一个月后不可使用.
6试验细菌
应使用下列革兰氏阳性和其中一种革兰氏阴性菌种.
金黄色葡萄球菌Staphylocaccasaureas（ATCC 6538）革兰氏阳性；肺炎克雷伯氏菌Klebsiellapneamomiae（ATCC4352）革兰氏阴性；大肠杆菌Escherichia coli（8099或ATCC11229）革兰氏阴性.
7试验菌液的制备
7.1冻干菌的活化
将冻干菌融化分散在5mL的营养肉汤中成悬浮状，在37C士2C下培养18h~24h.用接种环取菌悬液以划线法接种到琼脂培养基平Ⅲ上，在37C士2C下培养18h~24h.
从培养Ⅲ上取典型菌落接种在琼脂培养基斜面试管内，在37C士2C下培养18h~24h.将斜面试管贮存于冰箱内（5C～10C），作为保存菌，保存期不超过一个月，每月传代一次，传代次
数不超过10代.
7.2试验菌液的制备
7.2.1用接种环取保存菌，以划线法接种到琼脂培养基平Ⅲ上，37C士2C下培养24h.7.2.2取营养肉汤20mL放入100mL的三角烧瓶内，用接种环取7.2.1平Ⅲ上的典型菌落接种在肉 注：该平Ⅲ在5C~10C条件下保存，在1周内使用.汤内培养.培养条件为：温度37C土2C，振动频率110min，时间18h~24h.7.2.3用蒸馏水20倍稀释营养肉汤，用其调节培养后的菌浓度为1X10CFU/mL~5X10CFU/mL，作
2
为试验菌液.采用分光光度计或适当的方法测定菌液浓度.
注：该试验菌液冰冷保存（3C~4T).在4h内使用.
8试样的准备
8.1试样
从样品上选取有代表性的试样，每种菌试验4块（正面2块，反面2块）圆形试样，直径为25mm士5mm.试样不应进行灭菌.
注1：短纤维、长绒毛织物可剪碎，在培养基上形成一厚层.为便于操作、可将一玻璃环先放在琼脂培养基上，填充试验材料后，再拿开.
注2：由于涂层织物不透气，可能会抑制细菌的生长.这种情况下，可将试样剪成小条，排故在培养基上，每条之间留有小空原.
8.2对照样
取1块与试样材质相同但未经抗菌整理的材料作为对照样，尺寸与试样相同.如果没有，则取不经任何处理的100%棉织物.
乐6
9.1准备下层无菌培养基.向无菌平Ⅲ中倾注10mL琼脂培养基，并使其凝结.
9.2准备上层接种培养基.取45C士2C的琼脂培养基150mL放入烧瓶，加人1mL试验菌液.振9.3用无菌镊子将试样和对照样分别放于平Ⅲ中央，均匀地按压在琼脂培养基上，直到试样和琼脂培 内使用.养基之间很好地接触.9.4将试样放在琼脂培养基上后，立即放人37C士2C的培养箱中培养18h~24h，要确保在整个培
荡烧瓶使细菌分布均匀，向9.1中的每个平Ⅲ中倾注5mL，并使其凝结，接种过的琼脂培养Ⅲ应在1h
养期中试样和琼脂培养基保持接触，
10结果的计算和评价
10.1每个试样至少测量3处，并按式（1）计算试样的抑菌带宽度.
式中：
H一抑菌带宽度，单位为毫米（mm）；D-抑菌带外径的平均值，单位为毫米（mm）；d-试样直径，单位为毫米（mm）.
10.2测定抑菌带后，用镊子将试样从琼脂培养基上移去，用显微镜检查试样下面接触区域的细菌繁殖情况.
10.3根据细菌繁殖的有无和抑菌带的宽度，按表1评价每个试样的抗菌效果.
表1抗菌效果评价
试样下面的抑菌带宽度/mm 细菌繁殖情况 评 价>1 无 抑菌带大于1mm.没有繁殖~1 无 抑菌带在1mm之内，没有繁殖 效果好0: 无 没有抑菌带，没有繁殖 效果较好0 轻微 没有抑菌带，仅有少量菌落，繁殖几乎被抑制
