中华人民共和国国家标准
GB/T21512-2008
食用植物油中叔丁基对苯二酚（TBHQ） 的测定
Determination of tert-butylhydroquinone(TBHQ）in edible vegetable oil
中国国家标准化管理委员会 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局 发布
前言
本标准参考美国官方分析化学师协会（AOAC）公定方法983.15（第十六版）《油脂和奶油中酚类抗与2，6-二叔丁基对甲酚（BHT）的测定方法》、轻工行业标准QB2395-1998《食品添加剂特丁基对苯二酚（TBHQ）中的有关原理和技术内容，在试验的基础上，通过简化操作步骤，提高方法的可操作性和准确性而研究制定.
本标准由国家粮食局提出.
本标准由全国粮油标准化技术委员会归口.
本标准起草单位：北京市粮油食品检验所.
本标准主要起草人：阮玲、尚艳城、呙琴、王郑平、夏天文.
食用植物油中叔丁基对苯二酚（TBHQ） 的测定
1范围
本标准规定了采用气相色谱、液相色谱测定叔丁基对苯二酚（TBHQ）的原理、试剂、仪器和设备、分析步骤、结果计算及精密度.
本标准适用于较低熔点的食用植物油中TBHQ含量的测定.
本标准不适用于熔点高于35C以上的食用植物油中TBHQ含量的测定.
本标准定量限：气相色谱法为0.001g/kg.液相色谱法为0.006g/kg.
本标准中气相色谱法为仲裁方法.
2规范性引用文件
下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款，凡是注日期的引用文件，其随后的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然面，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本.凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准.
GB/T5524植物油脂检验扦样、分样法 GB/T15687油脂试样制备
3气相色谱法
3.1原理
定量. 食用植物油中的TBHQ经体积分数为80%乙醇提取、浓缩、定容后，用气相色谱仪测定，外标法
3.2试剂
除非另有说明，本标准所使用的试剂为分析纯，水为蒸馏水或去离子水或相当纯度的水.
3.2.5TBHQ标准储备溶液（1000μg/mL）：准确称取TBHQ基准试剂（相对分子质量166.22，含量≥98.0%）0.1000g，放入小烧杯中，用1mL无水乙醇溶解TBHQ品体后，加入5mL左右二硫化碳，转移到100mL容量瓶中.再用1mL无水乙醇洗涤烧杯后，加人5mL左右二硫化碳，转移到容量瓶 中，用二硫化碳至少洗涤3次烧杯，定容至100mL，配成浓度为1000μg/mL的TBHQ标准储备液，置于棕色瓶中4C下保存，可保存6个月，
3.3仪器和设备
3.3.1气相色谱仪：具有氢火焰离子化检测器（FID）. 3.3.2混合器：旋涡式混合器.3.3.3比色管：25ml3.3.4瓷蒸发Ⅲ：60ml.
GB/T 21512-2008
3.3.5刻度试管：2mL或5mL.
3.3.6微量注射器.
3.4分析步骤
3.4.1样品的扦样、分样和制备
按GB/T5524GB/T15687执行.
3.4.2试样处理
准确称取试样2.00g于25mL比色管中，加人6mL80%乙醇溶液置旋涡混合器上混合3s~5s到蒸发Ⅲ中（用吸管转移时切勿将油滴带人）.再用6ml80%乙醇溶液重复提取试样两次，提取液一 （或振摇15s），静置片刻，放入90C左右的水浴中加热促其分层，分层后立即将上层提取液用吸管转移并加人蒸发Ⅲ中.将蒸发Ⅲ放在60C水浴上通风挥发或自然挥发至近干（切勿蒸干），向蒸发Ⅲ中加人二硫化碳，少量多次洗涤蒸发Ⅲ中残留物，转移到刻度试管中，用二硫化碳定容至2.0mL，作为试样测定液.
3.4.3色谱参考条件
色谱柱：玻璃柱.内径3mm.长3m，填装涂布2%OV-1固定液的80目~100目Chromosorb WAW DMCS.
仪器条件：检测器和进样口温度250C，柱湿180C.氮气压力250kPa，氢气压力65kPa，空气压力 55 kPa
3.4.4测定
3.4.4.1制作标准曲线
准确移取TBHQ 标准储备溶液 0. 0 mL、2.5 mL、5.0 mL、7. 5 mL、10. 0 mL、12.5 mL 于50 mL 容量瓶中，用二硫化碳定容，制备成浓度为0μg/mL、50μg/mL、100μg/mL、150μg/mL、200μg/mL、仪测定.以TBHQ峰面积为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线.
3.4.4.2试样测定
用干净的微量注射器准确吸取2uL测定液，注人气相色谱仪测定，取试样的TBHQ峰面积与标准曲线比较定量.
3.5结果计算
试样中的叔丁基对苯二酚（TBHQ）含量按式（1）进行计算：
(1)
式中：
X一试样中的叔丁基对苯二酚（TBHQ）含量，单位为克每千克（g/kg）；（一由标准曲线上查出的试样测定液中相当于TBHQ的浓度，单位为微克每毫升（μg/mL)；V试样提取液的体积.单位为毫升（mL）；m试样的质量，单位为克（g）.
计算结果保留两位有效数字.
3.6精密度
在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过其算术平均值的10%.
4液相色谱法
4.1原理
食用植物油中的TBHQ经体积分数为95%乙醇提取、浓缩、定容后，用液相色谱仪测定，外标法定量.
4.2试剂
4.2.1甲醇：色谱纯.
4.2.336%乙酸：分析纯.
4.2.495%乙醇：分析纯，
4.2.7TBHQ标准储备溶液（1000ug/mL）：准确称取TBHQ基准试剂（相对分子质量166.22.含量≥98.0%）0.0500g，放入小烧杯中，用异丙醇-乙晴混合液溶解，转人50mL容量瓶中，再用少量混合液洗涤烧杯3次，转人容量瓶中，用异丙醇-乙晴混合液定容至50mL，配成浓度为1000μg/mL的TBHQ标准储备液，置于棕色瓶中4C下保存，可保存6个月.
中，用异丙醇-乙晴混合液定容至100mL，置于棕色瓶中4C下保存.
4.3仪器
4.3.1高效液相色谱仪：配有二极管阵列或紫外检测器.4.3.2蒸发器：真空旋转蒸发器.4.3.3混合器：旋涡式混合器. 4.3.4具塞试管：10ml、25mL.4.3.5浓缩瓶.4.3.6微量注射器.
按GB/T5524、GB/T 15687 执行.
4.4.2试样处理
准确称取试样2.00g于25mL比色管中，加人6ml95%乙醇溶液，置旋涡混合器上混合3s~5s（或振摇15s），静置片刻，放入90C左右水浴中加热促其分层，分层后立即将上层提取液用吸管转移到浓缩瓶中（用吸管转移时切勿将油滴带人）.再用6mL95%乙醇溶液重复提取试样两次，合并提取液于浓缩瓶内，该液可放在冰箱中储存约16h.
乙醇提取液在40C下，10min内，用真空旋转蒸发器浓缩至约1mL.将浓缩液转移至10mL试管中，用异丙醇-乙晴混合液至少洗涤3次浓缩瓶，定容至10mL，经0.45um滤膜过滤于小瓶中，作为试 样测定液.
4.4.3色谱参考条件
色谱柱：C柱，250mm×4.6mm（内径）.
流动相：（A）甲醇-乙睛混合液[v（甲醇）V（乙晴）=11]；（B）5%乙酸水溶液（100mL水加5 mL 36%乙酸).
柱箱温度：40C.
波长：280 nm.
流速：2mL/min
洗脱梯度：0 min~8 min 流动相（A)从30%线性增至 100% 8min~14min流动相（A)100%.14min~17min流动相（A)从100%降至30%.
