中华人民共和国国家标准
GB/T22972-2008
牛奶和奶粉中噻苯达唑、阿苯达唑、 芬苯达唑、奥芬达唑、苯硫氨酯 残留量的测定液相色谱-串联质谱法
Determination of thiabendazole.albendazolefenbendazole oxfendazoleand febantelresidues in milk and milk powderHPLC-MS-MSmethod
中国国家标准化管理委员会 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局 发布
前言
本标准的附录A、附录B为资料性附录.
本标准起草单位：中华人民共和国秦皇岛出人境检验检疫局、中华人民共和国沈阳出人境检验检疫局.
本标准主要起草人：赵颖、刘宁、金雁、孟祥勇、姚家彪、庞国芳.
牛奶和奶粉中噻苯达唑、阿苯达唑、 芬苯达唑、奥芬达唑、苯硫氨酯 残留量的测定液相色谱-串联质谱法
1范围
本标准规定了牛奶和奶粉中曝苯达唑、阿苯达唑、芬苯达唑、奥芬达唑和苯硫氨酯残留量的液相色谱-串联质谱测定方法.
本标准适用于牛奶和奶粉中曝苯达唑、阿苯达唑、芬苯达唑、奥芬达唑和苯硫氨酯残留量的测定.
本标准的方法检出限：牛奶中噻苯达唑、阿苯达唑、芬苯达唑、奥芬达唑和苯硫氨酯的检出限为0.01mg/kg：奶粉中噻苯达唑、阿苯达唑、芬苯达唑、奥芬达唑和苯硫氨酯的检出限为0.08mg/kg.
2规范性引用文件
的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然面，鼓励根据本标准达成协议的各方研究 下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款.凡是注日期的引用文件，其随后是否可使用这些文件的最新版本.凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准.
GB/T6379.1测量方法与结果的准确度（正确度与精密度）第1部分：总则与定义(GB/T 6379. 1-2004 ISO 5725-1:1994 IDT)
性与再现性的基本方法（GB/T6379.2-2004，ISO5725-2：1994，IDT) GB/T6379.2测量方法与结果的准确度（正确度与精密度）第2部分：确定标准测量方法重复
GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法（GB/T6682-2008，1SO3696：1987 MOD）
3原理
样品经乙晴提取，C固相萃取柱净化，液相色谱-中联质谱仪测定，外标法定量.
4试剂和材料
除另有说明外，所用试剂均为分析纯.
4.1水：GB/T6682，-级. 4.2乙睛：色谱纯.4.3甲醇：色谱纯.4.4正丙醇.4.6碳酸钠（NaCO）. 4.7碳酸氢钠溶液：0.1mol/L.称取8.4g碳酸氢钠（4.5），用水溶解，定容至1000mL.4.8碳酸钠溶液：0.1mol/L.称取1.06g碳酸钠（4.6）.用水溶解，定容至100mL.4.9碳酸盐缓冲溶液（pH值为9.1):将0.1mol/L碳酸氢钠溶液（4.7)900mL与0.1mol/L碳酸钠溶液（4.8）100mL混合.4.10标准物质：苯达唑（thiabendazole CAS：148-79-8）、阿苯达唑（albendazole CAS：54965-21-8）、芬 苯达唑（fenbendazole CAS：43210-67-9）、奥芬达唑（oxfendazoleCAS：53716-50-0）和苯硫氨酯（febantelCAS：58306-30-2)的纯度均≥99%
4.5碳酸氯钠（NaHCO）.
GB/T 22972-2008
4.11标准储备溶液：1.0mg/ml.准确称取适量的五种苯并味唑类药物标准物质（4.10），分别用甲醇（4.3）配制成浓度为1.0mg/mL的标准储备液.保存于0C~4C冰箱中.4.12混合标准储备溶液：100μg/mL.吸取适量五种苯并咪唑类药物标准储备溶液（4.11）.用甲醇稀 释成100μg/mL的混合标准溶液，于0C~4C冰箱保存.液（4.12），用空白样品提取液配成系列浓度的基质混合标准工作溶液，当天配制.4.14C固相萃取柱：500mg.6mL.使用前依次用5mL甲醇、5mL水和2mL碳酸盐缓冲液（4.9）4.15滤膜：0.2 yum. 预处理，同时保持柱体湿润.
4.13基质混合标准工作溶液：根据每种标准的灵敏度和仪器线性范围，吸取一定量的混合标准储备溶
5仪器
5.2分析天平：感量0.01g和0.1mg. 5.1液相色谱-串联四极杆质谱仪，配有电喷雾离子源.5.3固相萃取装置.5.4旋转蒸发仪.5.5离心机：转速4000r/min以上.5.6涡旋混匀器. 5.7超声波清洗器.
6试样制备与保存
6.1试样制备
样品受到污染或发生残留物含量的变化. 取代表性样品约500g，混匀，装人洁净容器密封，标明标记，在抽样及制样的操作过程中，应防止
6.2试样保存
将试样于0C~4C保存.
7测定步骤
7.1提取
7.1.1牛奶样品
称取10g牛奶试样，精确至0.01g，置于100mL具塞离心管中.加人30mL乙，涡旋混匀） 发除去有机溶剂，用碳酸盐缓冲溶液（4.9）定容至10ml.
7.1.2奶粉样品
称取12.5g奶粉试样于烧杯中，加适量35C～45C水将其充分溶解，待冷却至室温后，加水至100g，混匀，准确称取10g试样，精确至0.01g，置于100mL具塞离心管中，按7.1.1步骤进行处理.
7.2净化
移取5mL提取液，注入预处理过的C固相萃取柱（4.14），调节流速为1.0mL/min，用5mL水淋洗，弃去全部流出液后抽干.用6mL乙睛（4.2）洗脱被测物，流速1.0mL/min，40C水浴氮气吹干，再用甲醇溶液（14）溶解并定容至1.0mL，过0.2pm滤膜（4.15），供液相色谱-串联质谱测定.
7.3测定
7.3.1液相色谱条件
液相色谱条件如下：a）色谱柱：BEHCs，1.7xm，50mm×2.1mm（内径）或相当者：
b）柱温：40 C；c）进样量：10l;d）流动相及流速见表1.
表1液相色谱梯度洗脱条件
说速/(μL/min) 甲醇/% 0.1%甲酸水溶液/%0 0 0 5 9512.0 200 90 1012 1 200 5 9614.0 200 5 96
7.3.2质谱条件
质谱条件如下：
b）扫描方式：正离子扫描； a）离子源：电喷雾离子源：检测方式：多反应监测：电离电压：2.0kV；e) 离子源温度：110C：f) 锥孔反吹气流量：80L/h；h) g) 脱溶剂气温度：380C： 脱溶剂气流量：700L/h；五种苯并咪唑类药物定性离子对、定量离子对、锥孔电压及碰撞能量质谱参数见表2.
表2五种苯并咪唑类药物的质谱参数
化合物名称 母离子（m/z） 子离子（m/z） 锥孔电压/V 碰撞能量/eV噻苯达唑 202 0 174 7* 46 25130.7 46 31阿苯达喔 266 0 233 9 34 19190. 9 34 33芬苯达喔 300 0 267 9 158.7 34 34 21 34158 7 38 34奥芬达唑 316 0 190.8 38 21382 9 26 18苯殖氨酯 447 0 414 9 26 14"定量离子.
7.3.3液相色谱-串联质谱测定
7.3.3.1定性测定
与标准溶液中相对应物质的保留时间偏差在土2.5%之内：且样品谱图中各组分定性离子的相对丰度与 每种被测组分选择一个母离子，两个以上子离子，在相同实验条件下，样品中待测物质的保留时间浓度接近的基质标准溶液谱图中对应的定性离子的相对丰度进行比较，若偏差不超过表3规定的范围，则可判定为样品中存在对应的待测物.
