中华人民共和国国家标准
GB/T23228-2008
卷烟主流烟气总粒相物中 烟草特有N-亚硝胺的测定 气相色谱-热能分析联用法
Cigarette-Determination of tobacco specificN-Nitrosaminesin totalparticulate matter ofmainstream cigarette smoke-GC-TEAmethod
中国国家标准化管理委员会 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局 发布
前言
本标准的附录A、附录B为资料性附录.本标准由国家烟草专卖局提出. 本标准由全国烟草标准化技术委员会（SAC/TC144）归口.本标准起草单位：中国烟草总公司郑州烟草研究院、上海烟草（集团）公司.本标准主要起草人：谢复炜、金永明、赵明月、王昇、刘克建、吴鸣.
卷烟主流烟气总粒相物中 烟草特有N-亚硝胺的测定 气相色谱-热能分析联用法
1范围
本标准规定了卷烟主流烟气总粒相物中N-亚硝基降烟碱（NNN）、N-亚硝基新烟碱（NAT）、N-亚硝基假木贼碱（NAB）和4-（甲基亚硝胺基）-1-（3-吡啶基）-1-丁酮（NNK）四种烟草特有亚硝胺的测定方法.
本标准适用于卷烟姻气总粒相物中以上四种姻草特有亚硝胺的测定.
2规范性引用文件
下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款.凡是注日期的引用文件，其随后的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然面，鼓励根据本标准达成协议的各方研究 是否可使用这些文件的最新版本.凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准.
GB/T5606.1卷烟第1部分：抽样
GB/T19609卷烟用常规分析用吸烟机测定总粒相物和焦油（GB/T19609-2004，ISO4387：2000 MOD)
3术语和定义
下列术语和定义适用于本标准.
3. 1
烟草特有亚硝胺tobacco specific nitrosamines（TSNAs）
仅在烟草及烟草制品中存在的N-亚硝胺.
4原理
用玻璃纤维滤片捕集卷烟主流烟气中的总粒相物，用二氧甲烷萃取粒相物中的TSNAs，浓缩萃取物并采用碱性氧化铝层析柱进行纯化.通过气相色谱-热能分析联用仪（GC-TEA）检测萃取物中亚硝 胺的浓度，对主流烟气总粒相物中TSNAs进行定量分析.
5试剂与材料
除特别要求以外，均应使用分析纯级试剂.水应为蒸馏水或同等纯度的水.
5.1二氯甲烷，色谱纯（或分析纯经重蒸后使用）. 5.2甲醇，色谱纯（或分析纯经重蒸后使用）.5.3无水硫酸钠.5.4碱性氧化铝，200目~300目.5.5N-戊基-（3-甲基毗啶基）亚硝胺、NNNNATNAB NNK，纯度应大于97%.5.6.1内标储备液 5.6内标溶液
准确称量10mgN-戊基-（3-甲基吡啶基）亚硝胺，加人约50mL二氯甲烷（5.1）完全溶解后，转移
至100mL的棕色容量瓶中，用二氯甲烷（5.1)定容至刻度.该内标储备液在一20C冰箱内存放，有效期为6个月.
5.6.2一级内标溶液
准确移取2mL内标储备液（5.6.1）至50mL棕色容量瓶中，用二氯甲烷（5.1）定容至刻度.该一级内标溶液在一20C冰箱内存放，有效期为6个月.
5.6.3二级内标溶液
准确移取10mL一级内标溶液（5.6.2）至100mL棕色容量瓶中，用二氯甲烷（5.1）定容至刻度.该二级内标溶液在一20C冰箱内存放，有效期为3个月.
5.7TSNAs标准溶液
5.7.1标准储备液
分别准确称量10mgNNN、NATNAB和NNK.加人约5mL二氯甲烷（5.1）完全溶解后，转移至10mL的棕色容量瓶中，用二氯甲烷（5.1）定容至刻度.该标准储备液在一20C冰箱内存放，有效期为6个月.
5.7.2一级标准溶液
准确移取1mL标准储备液（5.7.1）至100mL棕色容量瓶中，用二氯甲烷（5.1）定容至刻度.该一级标准溶液在一20C冰箱内存放，有效期为6个月.
5.7.3二级标准溶液
准确移取1mL一级标准溶液（5.7.2）至10mL棕色容量瓶中，用二氯甲烷（5.1）定容至刻度.该二级标准溶液在一20C冰箱内存放，有效期为3个月.
5.8TSNAs校准溶液：分别准确移取0.5mL、1mL、2mL、5mL二级标准溶液（5.7.3）和1mL、2mL一级标准溶液（5.7.2）至10mL棕色容量瓶中，准确加入1mL一级内标溶液（5.6.2），最后用二氯甲烷（5.1）定容至刻度，此六个标准溶液为系列标准校准溶液.该TSNAs校准溶液应在使用前配制.
注：烟草特有亚硝胺是强烈致癌物质.前处理操作应在通风棚内进行，实验人员应佩带防护手套、面具以保证安全，实验废液收集后应统一处理.
6仪器设备
常用实验仪器以及下述各项.6.2气相色谱-热能分析联用仪.6.5色谱柱，弹性毛细管柱30m×0.53mm×1m，建议固定液：HP-50. 6.4旋转蒸发仪.6.6保护柱，弹性石英毛细管柱1m×0.53mm，应经脱活处理.6.7玻璃层析柱，具塞，内径为20mm，长度为300mm.
6.1分析天平，精确至0.1mg.
6.3超声波发生器.
7抽样
按照GB/T5606.1的规定抽取实验室样品.
8分析步骤
8.1卷烟的抽吸
按照GB/T19609的规定收集20支卷烟的粒相物.
8.2测定次数
每个样品应平行测定两次.
8.3样品分析
8.3.1样品萃取
（5.1）分三次超声波萃取，每次10min，第一次使用100mL二氧甲烷，其余两次各使用80mL二氯甲 将描集有主流烟气粒相物的滤片放人250mL锥形瓶中，置于超声波发生器（6.3）内，用二氯甲烷烷.将萃取液经无水硫酸钠（5.3）过滤，转移至500mL磨口圆底烧瓶中.
8.3.2萃取液浓缩
将盛有萃取液的圆底烧瓶连接旋转蒸发仪（6.4）.通高纯氮气旋转蒸发（40C水浴），浓缩至5mL.
8.3.3样品净化
8.3.3.1层析柱的准备
碱性氧化铝（5.4）在110C下活化2h.玻璃层析柱（6.7）应保持洁净干燥，先加人30mL二氯甲烷（5.1)，再用湿法将15g碱性氧化铝（5.4）加到层析柱中，充分搅拌并赶走气泡.用50mL二氧甲烷淋洗层析柱.
8.3.3.2层析
将浓缩后样品（8.3.2）一次性加人按照8.3.3.1准备的层析柱中，并用二氯甲烷（5.1）分三次洗涤烧瓶壁，每次5mL.用30mL二氯甲烷淋洗层析柱，流速应控制在约2mL/min，不收集洗脱液.用100mL8%甲醇-二氧甲烷（体积分数）溶液淋洗层析柱，收集此部分洗脱液.
8.3.4洗脱液浓缩
瓶中，浓缩至约1mL后，移至2mL色谱分析瓶中待分析. 在洗脱液中加入1ml二级内标溶液（5.6.3）后，通高纯氮气浓缩至30mL，转移至50mL梨形烧
8.4分析
按照制造商操作手册运行气相色谱-热能分析联用仪，以下分析条件可供参考，采用其他条件应验证其适用性.
程序升温：初始温度150C，保持2min；以3C/min速率升至230C，20C/min速率升至 260C，保持20 min进样口温度：230C：载气：氮气恒流10mL/min：进样量2gL，不分流，不分流时间1min，吹扫流量50mL/min； 热裂解温度：550C：一接口温度：250C.典型卷烟样品色谱图参见图A.1.
8.5测定
作为纵坐标，TSNAs的浓度作为横坐标，分别建立四种TSNAs成分的校正曲线.对校正数据进行线 用气相色谱-热能分析联用仪测定一系列TSNAs校准溶液（5.8），用TSNAs与内标峰面积的比值性回归，R应不小于0.99.测定样品，根据样品中的峰面积计算每一个卷烟烟气样品中四种TSNAs的浓度（ng/mL).
9结果的计算与表述
由式（1）计算出样品主流烟气中四种TSNAs的传输量，以每支卷烟主流烟气TSNAs传输量来表示，单位为ng.取两个平行测定的算术平均值作为样品的测试结果，结果精确到0.01ng.
式中：
X--每支卷烟主流烟气TSNAs的传输量，单位为纳克/每支（ng/支）；
