中华人民共和国国家标准
GB/T30390-2013
Determination of monosaccharide and disaccharide in oil seedsHigh-performance liquid chromatography
中国国家标准化管理委员会 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局 发布
前言
本标准按照GB/T1.1一2009给出的规则起草.本标准由中华人民共和国农业部种植业管理司提出并归口.本标准主要起草人：李培武、胡小风、张文、丁小霞、周海燕.
油料种籽中果糖、葡萄糖、蔗糖含量的测定 高效液相色谱法
1范围
本标准规定了油料种籽中果糖、葡萄糖、蔗糖含量测定的高效液相色谱法.本标准方法检出限；果糖、葡萄糖、蔗糖均为2mg/g. 本标准适用于油料种籽中果糖、葡萄糖、蔗糖含量的测定.
2规范性引用文件
件.凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括的修改单）适用于本文件. 下列文件对于本文件的应用是必不可少的.凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文
GB5491粮食、油料检验扦样、分样法GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法GB/T14489.1油料水分及挥发物含量测定
3原理
试样经沉淀蛋白质和萃取脂肪后过滤，滤液经氨基色谱柱分离，用高效液相色谱（带示差折光检测器或蒸发光散射检测器）测定，外标法定量.
4试剂和材料
除非另有说明，均使用分析纯试剂水为GB/T6682规定的二级水.
4.1乙晴：色谱纯. 4.2石油醚：沸程30℃~60℃.4.3乙酸锌溶液（1mol/L)：称取21.9g乙酸锌（C H.O Zn2HO).加3mL冰乙酸，加水溶解稀释至 100 mL.4.4亚铁氰化钾溶液（1mol/1)：称取10.6g亚铁氰化钾（K [Fe（CN），]3HO}，加水溶解稀释至 100 mL.4.5果糖、葡萄糖、蔗糖标准品纯度≥99%.4.6糖系列标准储备液（20mg/g）：分别称取1g（精确至0.1mg）经过96℃土2℃C干燥2h后的果糖、葡萄糖，蔗糖标准品于50mL容量瓶中，加水溶解并定容.溶液放置于4C下，可保存一个月. 4.7糖系列标准工作液：分别准确吸取糖系列标准储备液（4.6）0.00mL0.05mL.、0.25mL、0.50mL、1 mL、2.50mL、5.00mL于10mL容量瓶中 加水溶解并定容，分别相当于0.0mg/g、0.1mg/g、前8/80°018/808/808/8018/8°0
5仪器设备
5.1高效液相色谱仪：带有示差折光检测器或者蒸发光散射检测器.
GB/T 30390-2013
5.2电子天平：感量0.1mg和1mg.5.4磁力搅拌器. 5.3恒温烘箱.5.5粉碎机.5.6恒温水浴.5.7离心机：2 000 r/min.
6样品制备
6.1按GB/T5491取样品约200g，经粉碎机粉碎，过0.64mm孔径筛，置于密闭容器内.6.2花生样品应先切片，再经粉碎机粉碎.
7分析步骤
7.1提取
称取试样5g（精确至0.1mg），置于50mL具塞离心管中，加人25mL石油醚（4.2），旋涡振荡1min.2000r/min离心5min，弃去上层石油醚.重复上述步骤2次.60℃C水浴蒸发残留的石油醚，用玻璃棒将样品转移至150mL恒重的锥形瓶中，用50mL水分两次冲洗离心管，洗液并入锥形瓶，缓 慢加人乙酸锌溶液（4.3）和亚铁氰化钾溶液（4.4）各5mL.再加水至溶液总质量约为100g（m，精确至1mg）室温搅拌30min后，用定性滤纸过滤，滤液再用0.45pm微孔滤膜过滤，待测.
7.2标准曲线绘制
度为横坐标、峰面积为纵坐标绘制标准曲线. 吸取糖标准工作液（4.7）于进样瓶中，液相色诺仪（带示差折光检测器或蒸发光检测器）测定，以浓
7.3样品中糖测定
吸取待测液于进样瓶中，液相色谱仪（带示差折光检测器或蒸发光检测器）测定根据标准曲线计算参见附录A. 样液中果糖、葡萄糖、蔗糖的含量，或者利用回归方程式计算样液中果糖、葡萄糖、蔗糖的含量.色谱图
7.4色谱参考条件
7.4.1色谱柱：氨基柱，4.6mm×250mm.5μm. 7.4.2柱温：40℃7.4.3流动相：乙腾（4.1)水=8515（体积分数）.7.4.4流速:1.0 mL/min.7.4.5进样体积：10L.7.4.6色谱图：参见图A.1.
8水分含量测定
按GB/T14489.1测定样品中水分含量.
9结果计算
试样中果糖、葡萄糖、蔗糖的含量以质量分数∞计，数值用mg/g表示，按式（1）计算：
式中：
样品中糖（果糖、葡萄糖、蔗糖）含量，单位为毫克每克（mg/g）；根据标准曲线算出的样液中糖的含量，单位为毫克每克（mg/g）：m：水溶液的总质量，单位为克（g）； Cm：试样的质量，单位为克（g）：水分及挥发物（质量分数），%.
测定结果取其两次测定的算术平均值，计算结果保留至小数点后一位.
10精密度
10.1重复性
在重复性条件下，获得的两次独立测试结果的绝对差值不大于算术平均值的10%.
10.2再现性
在再现性条件下，获得的两次独立测定结果的绝对差值不大于算术平均值的10%，
