中华人民共和国国家标准
GB/T30483-2013
Determination of theaflavins in tea-High performance liquid chromatography
中国国家标准化管理委员会 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局 发布
前言
本标准按照GB/T1.1-2009给出的规则起草.本标准由中华全国供销合作总社提出. 本标准由全国茶叶标准化技术委员会（SAC/TC339）归口.本标准起草单位：中华全国供销合作总社杭州茶叶研究院、国家茶叶质量监督检验中心.本标准主要起草人：周卫龙、徐建峰、陆小磊、许凌、叶美君.
茶叶中茶黄素的测定高效液相色谱法
1范围
本标准规定了用高效液相色谱（HPLC）测定茶及茶制品中茶黄素含量的仪器、试剂、操作方法、结果计算.
本标准适用于茶及茶制品中茶黄素含量的测定，也适用于咖啡碱、儿茶素及没食子酸的测定.
2规范性引用文件
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GB/T8302茶取样
GB/T8303茶磨碎试样的制备及其干物质含量测定
3原理
睛溶解.茶黄素（儿茶素）的测定用C柱、检测波长278nm、梯度洗脱、HPLC分析，用茶黄素（儿茶素） 茶叶磨碎试样中的茶黄素（儿茶素）用70%的甲醇溶液在70C水浴上提取，速溶茶用热的10%乙标准物质外标法直接定量.
4仪器
4.2水浴.4.3离心机：转速3500r/min.4.4混匀器.4.6液相色谱柱：C（粒径5μm，250mm×4.6mm）. 4.5高效液相色谱仪（HPLC）：包含梯度洗脱及紫外检测器（检测波长278nm）.
4.1分析天平：感量0.0001g.
5试剂
5.1除非另有说明，本方法所用试剂均为分析纯（AR），水为蒸馏水. 5.2乙晴：色谱纯.5.3甲醇.5.4冰乙酸.5.570%甲醇水溶液（体积分数）. 5.610 mg/mLEDTA-2Na溶液：现配.5.710mg/mL抗坏血酸溶液：现配.5.8稳定溶液：分别将25mLEDTA-2Na溶液（5.6）.25mL抗坏血酸溶液（5.7），50mL乙晴（5.2）加
GB/T 30483-2013
人500mL容量瓶中，用水定容至刻度，摇匀.
5.9液相色谱流动相5.9.1流动相A:分别将90mL乙晴（5.2），20mL冰乙酸（5.4）、2mLEDTA-2Na（5.6）加人1L容量 瓶中，用水定容至刻度，摇匀.溶液需过0.45μm膜.5.9.2流动相B:分别将800mL乙晴（5.2），20mL冰乙酸（5.4），2mLEDTA-2Na（5.6）加人1L容量瓶中，用水定容至刻度，摇匀.溶液需过0.45pm膜.5.10标准储备溶液5.10.1咖啡碱储备溶液：2.00mg/ml. 5.10.2没食子酸（GA）储备溶液：0.100mg/mL.5.10.3儿茶素储备溶液:C 1.00 mg/mL，EC 1.00 mg/mL EGC 2.00 mg/mL. EGCG 2.00 mg/ml ECG 2.00 mg/mL.5.10.4茶黄素储备溶液:TF 2.00 mg/mL TF-3-G 2.00 mg/mL TF-3′-G 2.00 mg/mL TFDG 2.005.11标准工作溶液：用稳定溶液（5.8）配制. mg/mL
标准工作溶液的浓度：没食子酸5μg/mL~25μg/mL、咖啡碱50μg/mL~150μg/ml、/80 /8/~/8/8~u/8 0 100 μg/mL ~ 400 μg/mL、 ECG 50 μg/mL ~ 200 μg/mL TF 100 μg/miL ~ 300 μg/mL、 TF-3-G100 μg/mL~300 μg/mL TF-3′-G 100 μg/mL~300 μg/mL TFDG 100 μg/mL~300 μg/mL
6操作方法
6.1取样
按 GB/T 8302的规定.
6.2试样制备
按 GB/T 8303的规定.
6.3测定步骤
6.3.1干物质含量测定
按GB/T8303的规定.
6.3.2供试液的制备
6.3.2.1茶叶：称取0.2g（精确到0.0001g）均匀磨碎的试样（6.2）于10mL玻璃离心管中，加人在70C中预热过的70%甲醇溶液（5.5）5mL，用玻璃棒充分搅拌均匀湿润，立即移人70℃水浴（4.2）中， 浸提10min（隔5min搅拌一次），浸提后冷却至室温，转人离心机（4.3）在3500r/min转速下离心10min，将上清液转移至10mL容量瓶.残渣再用5mL的70%甲醇溶液提取一次，重复以上操作.合并提取液定容至10mL，摇匀（该提取液在4℃下可至多保存24h）.用移液管移取上述提取液2mL6.3.2.2速溶茶：称取0.5g（精确到0.0001g）均匀的速溶茶于50mL容量瓶，加人不高于60℃的水 至10mL容量瓶中，用稳定溶液（5.8）定容至刻度，摇匀，过0.45μm膜，待测.溶解，加5mL乙晴（5.2）井用水定容至刻度，摇匀.用移液管移取上述提取液2ml至10mL容量瓶中，用稳定溶液（5.8）定容至刻度，摇匀，过0.45um膜，待测.
6.3.3色谱条件
流动相流速：1mL/min：柱温：35C：紫外检测器：入=278nm
梯度条件：100%A相保持10min15min内由100%A相→68%A相、32%B相68%A相、32%B相保持10min；100%A相
6.3.4测定
同的色谱条件下注射10pL测试液.测试液以峰面积定量. 待流速和柱温稳定后，进行空白运行.准确吸取10pL混合标准系列工作液注射入HPLC.在相
7结果计算
7.1计算方法
茶叶中茶黄素（儿茶素、咖啡碱、没食子酸）含量以干态质量分数（%）表示，按式（1）计算：
式中：
所测样品中被测成分的峰面积；A 一所测成分的校正因子（浓度/峰面积，浓度单位pg/mL）；样品提取液的体积，单位为毫升（mL）；d 稀释因子（通常为2ml稀释成10mL，则其稀释因子为5）；样品称取量，单位为克（g）； 一样品的干物质含量（质量分数）.%.te
7.2茶黄素（儿茶素类）总量计算公式
茶黄素总量按式（2）计算：儿茶素总量按式（3）计算： 茶黄素总量=TFTF-3-GTF-3-GTFDG （2)儿茶素总量=EGCCECEGCGECG ..(3)如果符合重复性（7.3），取两次测定的算术平均值作为结果，保留小数点后2位.
7.3重复性
在重复条件下同一样品获得的茶黄素总量（儿茶素总量、咖啡碱含量，没食子酸含量）测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的10%.
