中华人民共和国国家标准
GB/T31270.10-2014
Test guidelines on environmental safety assessment for chemicalpesticides-Part 10:Honeybee acute toxicity test
中国国家标准化管理委员会 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局 发布
前言
第2部分：水解试验： 一第1部分：土壤降解试验；一第3部分：光解试验：一第4部分：土壤吸附/解吸试验；第5部分：土壤淋溶试验； 第6部分：挥发性试验：第7部分：生物富集试验：第8部分：水-沉积物系统降解试验；-第9部分：乌类急性毒性试验；第11部分：家蚕急性毒性试验； 第10部分：蜜蜂急性毒性试验；-第12部分：鱼类急性毒性试验；第13部分：涵类急性活动抑制试验；第14部分：藻类生长抑制试验；一第16部分：土壤微生物毒性试验； 第15部分：账蚂急性毒性试验；第17部分：天敌赤眼蜂急性毒性试验：一第18部分：天敌两柄类急性毒性试验：一第19部分：非靶标植物影响试验； 第20部分：家畜短期饲喂毒性试验：第21部分：大型甲壳类生物毒性试验.本部分是GB/T31270的第10部分.本部分按照GB/T1.1-2009给出的规则起草.请注意本文件的某些内容可能涉及专利.本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任. 本部分由中华人民共和国农业部提出并归口.本部分负责起草单位：农业部农药检定所、环保部南京环境科学研究所.本部分主要起草人：袁善奎、徐晖、瞿唯钢、单正军、卜元卿、严清平、王会利.
GB/T31270《化学农药环境安全评价试验准则》分为21个部分：
化学农药环境安全评价试验准则 第10部分：蜜蜂急性毒性试验
1范围
GB/T31270的本部分规定了蜜蜂急性经口毒性试验和急性接触毒性试验的材料、条件、操作、质量控制、数据处理、试验报告等的基本要求.
本部分适用于为化学农药登记而进行的蜜蜂急性经口毒性试验和急性接触毒性试验，其他类型的农药可参照使用.
本部分不适用于易挥发和难溶解的化学农药.
2术语和定义
下列术语和定义适用于本文件.
2.1
半致死剂量median lethal dose
在急性经口试验或急性接触毒性试验中，引起50%的供试生物死亡时供试物剂量，用LD表示.注：单位发nga.i/蜂.
2.2 供试物test substance
试验中需要测试的物质.
2.3
化学农药chemical pesticide
利用化学物质人工合成的农药.其中有些以天然产品中的活性物质为母体，进行仿制、结构改造，创新面成，为仿生合成农药.
同义词：有机合成农药synthetic organic pesticide.
[NY/T 1667.1-2008 定义2.3.1]
2.4
原药technical material
在制造过程中得到的有效成分及杂质组成的最终产品，不能含有可见的外来物质和任何添加物，必要时可加入少量的稳定剂.
[NY/T 1667.2-2008 定义2.5.1]
2.5
制剂formulation product
由农药原药（或母药）和助剂制成使用状态稳定的产品.[NY/T1667.2-2008，定义2.4]
2.6
农药产品中具有生物活性的特定化学结构成分.[NY/T 1667.22008 定义3.1]
GB/T 31270.10-2014
2.7
参比物质reference substances
在测试中为证实或否定供试物的某种特性或判断测试系统有效性而使用的化学物质或混合物.
3试验概述
3.1方法概述
蜜蜂急性毒性试验包括急性经口毒性试验方法和蜜蜂急性接触毒性试验方法，根据农药登记管理法规及其他规定选择相关方法进行试验.
3.2急性经口毒性
将不同剂量的供试物分散在蔗糖溶液中，用以饲喂成年工蜂，并对药液的消耗量进行测定，药液消耗完后饲喂不含供试物的蔗糖溶液.在48h的试验期间每天记录蜜蜂的中毒症状及死亡数，并求出24h和48h的LD值及95%置信限.
3.3急性接触毒性
在蜜蜂被麻醉后，将不同浓度试验药液点滴在试验用蜜蜂的中胸背板处，待溶剂挥发后，将蜜蜂转并求出24h和48h的LD值及95%置信限. 人试验笼中，用脱脂棉浸泡适量蔗糖水饲喂.在48h的试验期间每天记录蜜蜂的中毒症状及死亡数，
4试验方法
4.1材料和条件
4.1.1供试生物
试验用蜜蜂推荐使用意大利成年工蜂（ApismelliferaL.)，供试蜜蜂应在清晨或前一日夜晚收集：喂一周；蜜蜂接受抗生素、抗螨虫药物后四周内不得用于试验.试验蜜蜂要求为健康、大小一致的个体. 避免在早春和晚秋季节进行蜜蜂试验，如果在早春和晚秋季节进行试验，要在试验环境下以蜂巢花粉何用于急性经口毒性试验的蜜蜂应在试验前饥饿2h.
4.1.2供试物
农药制剂、原药或纯品.难溶于水的可用少量对蜜蜂毒性小的有机溶剂、乳化剂或分散剂助溶.
4.1.3主要仪器设备
主要仪器设备如下：
电子天平； 试验蜂笼；人工气候室；微量点滴仪；饲喂器等.
4.1.4试验条件
试验在温度25℃土2℃、相对湿度50%~70%、黑暗条件下进行.
4.2试验操作
4.2.1急性经口毒性
4.2.1.1预试验
按正式试验的条件，以较大间距设置4个～5个剂量组，通过预试验求出试验用蜂最高全存活剂量与最低全致死剂量.
4.2.1.2正式试验
根据预试验确定的浓度范围按一定比例间距（儿何级差应控制在2.2以内）设置5个～7个剂量组，每组至少需10只蜜蜂，并设空白对照组，使用有机溶剂助溶的还需设置溶剂对照组，将贮蜂笼内的蜜蜂引入试验笼中，然后在饲喂器（如离心管、注射器等）中加入100μL～200μL含有不同浓度供试物的50%（质量浓度）蔗糖水溶液，并对每组药液的消耗量进行测定.一旦药液消耗完（通常需要3h~4h）， 将食物容器取出，换用不含供试物的蔗糖水进行饲喂（不限量）.对于一些供试物，在较高试验剂量下，蜜蜂拒绝进食，从而导致食物消耗很少或儿乎没有消耗的，最多延长至6h，并对食物的消耗量进行测定（即测定该处理的食物残存的体积或重量），对照组及各处理组均设3个重复.观察记录处理24h、48h后的中毒症状和死亡数.在对照组的死亡率低于10%的情况下，若处理24h和48h后的死亡率差异达到10%以上时，还需将观察时间最多延长至96h.
4.2.1.3限度试验
设置上限剂量100μga.i/蜂，即在供试物达100pga.i/蜂时仍未见蜜蜂死亡，则无需继续试验.如供试物溶解度小于100pga.i./蜂，则采用最大溶解度作为上限浓度.
4.2.2急性接触毒性
4.2.2.1预试验
按正式试验的条件，以较大间距设置4个~5个剂量组，通过预试验求出试验用蜂最高全存活剂量与最低全致死剂量.
4.2.2.2正式试验
每个处理至少需10只蜜蜂.同时设空白对照组及溶剂对照组，对照组及每一剂量组均设3个重复，供 根据预试验确定的剂量范围按一定比例间距（几何级差应控制在2.2以内）设置5个～7个剂量组，试物用丙酮等溶剂溶解，配制成不同浓度的药液.对准蜜蜂中胸背板处用微量点滴仪分别点滴各浓度供试药液1.0gL~2.0uL，待蜂身晾干后转入试验笼中，用50%（质量浓度）蔗糖水饲喂.观察记录处理24h、48h后的中毒症状和死亡数.在对照组的死亡率低于10%的情况下，若处理24h和48h后的死亡率差异达到10%以上时，还需将观察时间最多延长至96h.
4.2.2.3限度试验
设置上限剂量100μgai/蜂，即在供试物达100pga.i./蜂时仍未见密蜂死亡，则无需继续试验.如供试物溶解度小于100pμgai./蜂，则采用最大溶解度作为上限浓度.
4.2.3参比物质试验
为检验实验室的设备、条件、方法及供试生物的质量是否合乎要求，设置参比物质作方法学上的可
