中华人民共和国国家标准
GB/T31270.15-2014
Test guidelines on environmental safety assessment for chemicalpesticides-Part 15:Earthworm acute toxicity test
中国国家标准化管理委员会 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局 发布
前言
第2部分：水解试验： 一第1部分：土壤降解试验；一第3部分：光解试验：第4部分：土壤吸附/解吸试验；一第5部分：土壤淋溶试验： 一第6部分：挥发性试验：第7部分：生物富集试验：第8部分：水-沉积物系统降解试验；-第9部分：乌类急性毒性试验；第11部分：家蚕急性毒性试验； 第10部分：蜜蜂急性毒性试验；第12部分：鱼类急性毒性试验；第13部分：涵类急性活动抑制试验；第14部分：藻类生长抑制试验；第16部分：土壤微生物毒性试验； 第15部分：蚯蚓急性毒性试验；第17部分：天敌赤眼蜂急性毒性试验：一第18部分：天敌两柄类急性毒性试验；一第19部分：非靶标植物影响试验； 第20部分：家畜短期饲喂毒性试验；第21部分：大型甲壳类生物毒性试验.本部分是GB/T31270的第15部分.本部分按照GB/T1.1-2009给出的规则起草.请注意本文件的某些内容可能涉及专利.本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任. 本部分由中华人民共和国农业部提出并归口.本部分负责起草单位：农业部农药检定所、环保部南京环境科学研究所.本部分主要起草人：卜元卿、徐晖、金怡、程燕、杨海荣、魏方林、慕卫.
GB/T31270《化学农药环境安全评价试验准则》分为21个部分：
化学农药环境安全评价试验准则 第15部分：蚯蚓急性毒性试验
1范围
GB/T31270的本部分规定了蚂急性毒性试验的材料、条件、操作、质量控制、数据处理、试验报告等的基本要求.
本部分适用于为化学农药登记而进行的蚯蚓急性毒性试验，其他类型的农药可参照使用.
本部分不适用于易挥发和难溶解的化学农药.
2术语和定义
下列术语和定义适用于本文件.
蚯蚓身体前端表皮上的一种腺体，为鞍状或环带状，通常可通过颜色与蚯蚂身体其他部分区分开.
身体前端呈现出生殖带的蚯蚓.
2.3半致死浓度medianlethal concentration在急性毒性试验中，引起50%供试生物死亡时的供试物浓度，用LC表示.注：单位为mga i./kg干土.
2.4供试物test substance
试验中需要测试的物质.
2.5
化学农药chemicalpesticide
利用化学物质人工合成的农药.其中有些以天然产品中的活性物质为母体，进行仿制、结构改造，创新而成，为仿生合成农药.
同义词：有机合成农药synthetic organic pesticide，
[NY/T 1667.1-2008 定义2.3.1]
2.6
原药technical material
在制造过程中得到的有效成分及杂质组成的最终产品，不能含有可见的外来物质和任何添加物，必要时可加人少量的稳定剂.
[NY/T1667.2-2008，定义2.5.1]
2.7
制剂formulation product
由农药原药（或母药）和助剂制成使用状态稳定的产品.
[NY/T1667.2-2008 定义2.4]
2.8
有效成分active ingredient；a.i.
2.9
参比物质reference substances
在测试中为证实或否定供试物的某种特性或判断测试系统有效性而使用的化学物质或混合物.
3试验概述
在适量人工土壤加人农药溶液并充分拌匀，每个处理放人10条蚯蚓在适宜条件下培养两周，在第7d和第14d观察记录蚯蚓的中毒症状和死亡数，求出农药对蚯蚓的半致死浓度LC：值及95%置 信限.
4试验方法
4.1材料和条件
4.1.1供试生物
推荐选择赤子爱胜蚯蚓（Eiseniafoetida）成螺进行试验，体重在0.30g~0.60g之间.
4.1.2供试土壤
人工土壤（配方参见附录A）.
4.1.3供试物
供试物应使用农药制剂、原药或纯品.难溶于水的可用少量对蚯蚓毒性小的有机溶剂助溶，有机溶剂用量一般不得超过0.1mL（g）/L
4.1.4主要仪器设备
主要仪器设备如下：-标本瓶； 培养箱；一容量瓶等.
4.1.5试验条件
试验温度为20℃土2℃，相对混度为70%~90%，光照强度4001x~8001x，
4.2试验操作
4.2.1预试验
按正式试验的条件，以较大的间距设若干组浓度，求出供试物对蚯蚓全致死的最低浓度和全存活的最高浓度，在此范围内设置正式试验的浓度.
4.2.2正式试验
的还应增设溶剂对照组，并设一组不加农药的空白对照，每个浓度组均设3个重复.在标本瓶中放 在预试验确定的浓度范围内按一定级差设置5个～7个浓度组，并设一个空白对照组，使用助溶剂500g土（标本瓶中土壤厚度不低于8cm），加人农药溶液后充分拌匀（如用有机溶剂助溶时，需将有机溶剂挥发净），加适量蒸馏水调节土壤含水量占土壤干重的30%～35%.每个处理放入蚯蚓10条，用纱布扎好瓶口，将标本瓶置于20℃±2℃、湿度70%~90%、光照强度4001x~8001x的培养箱中.试蚯蚓无反应则为死亡），及时清除死蚯蚓.根据蚯7d和14d的死亡率，求出农药对蚯蚓的毒性LC 验历时两周，于第7d和第14d倒出瓶内土壤，观察记录蚯的中毒症状和死亡数（用针轻触蚯蚓尼部，值及95%置信限.
4.2.3限度试验
设置上限浓度100mga.i/kg干土，若未见蚯蚓死亡，则无需继续进行试验.
4.2.4参比物质试验
为检验实验室的设备、条件、方法、供试生物、供试土壤的质量是否合乎要求，应设置参比物质作方法学上的可靠性检验，参比物质为分析纯氯乙酰胺.
4.3数据处理
4.3.1统计分析方法的选择
可采用寇氏法、直线内插法或概率单位图解法计算得到每一观察时间（7d、14d）的LC和95%置信限，也可应用有关毒性数据计算软件进行分析和计算.
4.3.2寇氏法
用寇氏法可求出蚂在7d和14d的LC值及95%置信限.
LC的计算见式（1）：
式中：
X.最高浓度的对数；相邻浓度比值的对数；∑P各组死亡率的总和（以小数表示）.95%置信限的计算见式（2）：
标准误的计算见式（3）：
(3)
式中：
d b---各浓度组蚯蚓的数量.
p1个组的死亡率；
4.3.3直线内插法
采用线性刻度坐标，绘制死亡百分率对试验物质浓度的曲线，求出50%死亡时的LC值.
